【摘 要】
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本研究利用农杆菌介导法将AtPCS1和CYP78A5两个目的基因转入紫花苜蓿愈伤组织,并通过紫花苜蓿再生得到含有AtPCS1和CYP78A5目的基因的植株。再生植株具有富集重金属和有机污染
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本研究利用农杆菌介导法将AtPCS1和CYP78A5两个目的基因转入紫花苜蓿愈伤组织,并通过紫花苜蓿再生得到含有AtPCS1和CYP78A5目的基因的植株。再生植株具有富集重金属和有机污染物的能力,可以用来修复复合污染的土壤。螯合肽合成酶基因AtPCS1是与重金属富集相关的基因,细胞色素氧化酶基因CYP78A5是与有机物抗性、积累相关的基因。目前,国内外尚未出现同时利用这两个基因进行土壤修复的报道。 实验构建含有AtPCS1、CYP78A5基因的植物双元表达载体:用目的基因替换表达载体pBI121上的Gus基因,构建P35S-AtPCS1(CYP78A5)-T35S表达盒,然后通过冻融法将表达载体pBI121-AtPCS1、pBI121-CYP78A5转入农杆菌LBA4404中。 实验用含有AtPCS1、CYP78A5目的基因的农杆菌浸染紫花苜蓿下胚轴,通过组织培养,筛选出抗性愈伤组织,并诱导生芽生根,构建并优化了适合“三得利”紫花苜蓿的遗传转化再生体系。经共培养、选择培养最终获得了200株抗卡那霉素的转基因植株。 筛选出的抗性植株进行了DNA,RNA,蛋白质水平检测后,对转基因植株的抗重金属和有机物功能进行了鉴定。结果表明所获得抗性紫花苜蓿植株整合了外源目的基因AtPCS1和CYP78A5并进行了有效表达。
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