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目的:研究JAK-STAT信号转导通路在IFN-α促进及加速单核细胞分化产生高度活化的、部分成熟的DC(IFN-DC)发生发展过程中所起的作用。方法:采集正常供体动员的外周造血干细胞(G-PBSC),Ficoll法分离获得单个核细胞,采用磁珠分离获得CD14+单核细胞,根据培养条件的不同分为三组,分别为CD14+单核细胞(对照组),CD14+单核细胞+800U/mlGM-CSF(GM-CSF组)和CD14+单核细胞+1000U/mlIFN-α2b+800U/mlGM-CSF(IFN-α2b+GM-CSF组)。进行如下实验:1.IFN-α2b+GM-CSF组和GM-CSF组分别于加入细胞因子0min、10min、30min、1h、2h、4h提取总蛋白,通过Westernblot实验,观察两组在不同时间点下相关信号蛋白(JAK1,p-JAK1,STAT1及p-STAT1)的表达情况;并检测IFN-α2b+GM-CSF组和GM-CSF组分别加入JAK-STAT信号通路阻断剂(AG490)后相关信号蛋白的表达高峰是否减弱;2.以CD14+单核细胞CD80、CD86及CD83的表达水平作为基线水平,分别检测IFN-α2b+GM-CSF组和GM-CSF组各培养三天后上述CD分子的表达水平,并检测在以上两组分别加入AG490各培养三天后上述CD分子的表达水平。结果:1.IFN-α2b+GM-CSF组培养三天后的IFN-DC表达DC较为特征性标志,包括CD11c、CD86、CD80、HLA-DR及CD209;CD83为DC的成熟标志之一,在IFN-DC上部分表达;同时在浆细胞样树突状细胞(pDC)高表达的CD123,在IFN-DC亦高表达;培养三天后的细胞形态上可见突起。2.Westernblot检测IFN-α2b+GM-CSF组在不同时间点相关蛋白表达显示:JAK1和STAT1磷酸化水平在30min表达达到高峰,后逐渐减弱。予AG490干预后,JAK1和STAT1磷酸化水平在30min表达减弱。同时检测IFN-α2b+GM-CSF组均加入AG490培养三天后CD80及CD86表达明显下降,CD83弱表达。IFN-α2b+GM-CSF组干预后CD分子表达下降均具有统计学显著性差异(P<0.05)。结论:1.IFN-α2b联合GM-CSF可诱导CD14+单核细胞分化为树突状细胞。2.JAK-STAT信号通路在IFN-DC的分化中起着重要的作用。