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目的:为验证真菌竹黄的抗炎和抗肿瘤功效及其作用机理,本研究引入TNFα诱导的L929细胞作为模型,观察竹黄对模型细胞的影响,并从分子水平探索竹黄对TNFα信号通路上关键蛋白表达的影响,分析竹黄抗肿瘤和抗炎功效的可能作用机制。相关研究将为科学合理的开发利用竹黄这一中药资源提供理论实验依据。
方法:(1)应用SRB染色法测绘制生长曲线;(2)利用倒置显微镜和荧光显微镜观察细胞形态结构的改变:(3)流式细胞术分析细胞凋亡率的变化和对细胞周期产生的影响;(4)Western Blotting检测细胞内NF-κB P65蛋白、COX-2蛋白和BCL-2蛋白的表达情况。
结果:(1)竹黄在一定浓度范围内能有效降低TNFα对L929细胞的抑制作用,但当竹黄浓度达到30μg/ml时反过来促进TNFα对L929细胞的抑制作用;(2)竹黄能减轻TNFα诱导L929细胞后产生的S期阻滞现象;(3)竹黄对NF-κB P65蛋白的表达影响很小,只有达到至少30μ/ml时才有轻微抑制;(4)竹黄能抑制TNFα诱导的COX-2蛋白的表达;(5)竹黄在一定浓度范围内诱导BCL-2表达上调。
结论:(1)竹黄具有双向调节特性,推测竹黄中含有生物学活性相互拮抗的活性物质存在;(2)在一定浓度范围内竹黄中的有效成分主要通过COX-2、BCL-2信号途径影响TNFα信号网络,而对NF-κB信号通路没有显著影响。