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目的:肺纤维化(pulmonary fibrosis)是一种以弥漫性肺泡炎和肺泡结构紊乱为病理特征的疾病,临床上已有药物如糖皮质激素联合免疫抑制剂、氧疗法等对其进行治疗,但是发现这些治疗方法对根除这类疾病无显著功效。本实验旨在观察青蒿琥酯对博来霉素诱导的大鼠肺纤维化过程中IV型胶原、MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2表达的影响,为青蒿琥酯抗肺纤维化的作用机制提供理论依据,为阻滞肺纤维化提供新的思路。方法:实验分为两部分。第一部分为探讨青蒿琥酯对成纤维化大鼠肺组织IV型胶原、MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2表达的影响及其机制。雄性SD大鼠40只,随机分为生理盐水对照组(NS组)、博莱霉素+生理盐水模型组(BLM组)、博来霉素+青蒿琥酯治疗组(AT组)和生理盐水+青蒿琥酯对照组(AC组),各组大鼠随机分为10只/组。NS组和AC组气管内一次性给生理盐水约0.3 ml。BLM和AT气管内一次性给博来霉素5 mg/kg。次日NS组、BLM组每日腹腔注射生理盐水1 ml,AT组和AC组每日腹腔注射青蒿琥酯10 mg/100g。观察大鼠的一般状态。于28天后处死大鼠,计算肺系数,取肺组织进行HE染色,进行肺泡炎评分和肺纤维化评分,用Western blot检测MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2和IV型胶原表达情况。第二部分为探讨青蒿琥酯对成纤维化大鼠肺成纤维细胞(lungfibroblast,lf)中iv型胶原、mmp-2、mmp-9、timp-1和timp-2表达的影响及机制。在这一阶段的试验中,肺纤维化大鼠模型和分组与第一部分的肺纤维化模型相同,取雄性sd大鼠40只,各组大鼠随机分为10只/组,进行lf提取,细胞培养至第四代行免疫组织化学染色鉴定vimentin蛋白的表达,rt-pcr检测mmp-2、mmp-9、timp-1、timp-2和iv型胶原表达情况。结果:第一部分:(1)ns组和ac组大鼠一般状态良好。blm组和at组大鼠状态多有下降,大鼠毛发蓬松,无光泽,呼吸急促,肺部啰音明显且持续时间延长,精神萎靡,进食明显减少,活动少,体重减轻。但at组大鼠状态较blm组大鼠状态稍有好转。(2)ns组和ac组大鼠肺组织颜色红润,质地柔软,可见少量散在出血。blm组大鼠肺组织呈苍白色,表面凹凸不平,质地较硬,有些大鼠可见肺大泡。at组大鼠肺组织与blm组相比,肉眼未见明显差异。blm组的肺系数明显高于其他三组,差异具有统计学意义。(3)he染色显示ns组和ac组大鼠肺组织结构完整,可见大量的含气肺泡,见少量肺泡炎症细胞沉积,肺泡壁无明显增厚。少量胶原沉着。blm组肺泡结构明显破坏,出现大范围的肺实变。大量胶原沉积。at组中炎性细胞浸润较blm组减少,可见灶状的纤维化区域但病变程度较blm组轻。(4)肺泡炎评分和肺纤维化评分中,blm组明显高于其他三组,差异具有统计学意义。(5)blm组大鼠timp-1、timp-2、iv型胶原蛋白的表达显著高于其他三组。而mmp-2和mmp-9蛋白在blm组的表达高于NS组和AC组,但低于AT组。差异具有统计学意义。第二部分:(1)LF细胞呈长梭形,有伪足,胞体明亮,有较长的突起,胞核呈卵圆形,位于细胞中央,呈放射状或栅栏状排列,12h左右贴壁,2-3d左右伸展,4-5d进入对数生长期,7-8d后生长接近融合,并彼此连接成网状。(2)免疫组化结果可见,Vimentin蛋白表达于LF细胞质中,呈黄棕色网状形态分布,视野内几乎均呈阳性表达。阳性表达率为99.4%(3)BLM组大鼠TIMP-1、TIMP-2、IV型胶原mRNA的表达显著高于其他三组。而MMP-2和MMP-9 mRNA在BLM组的表达高于NS组和AC组,但低于AT组。差异具有统计学意义。结论:(1)青蒿琥酯可以抑制博来霉素诱导的肺纤维化,能够减轻大鼠肺泡炎、减少胶原的沉积和降低肺纤维化严重程度。(2)青蒿琥酯对肺纤维化大鼠肺组织中IV型胶原、TIMP-1、TIMP-2的表达有一定的下调作用,但对MM-2/9的表达呈上调趋势。(3)青蒿琥酯对肺纤维化大鼠的LF中IV型胶原、TIMP-1、TIMP-2的表达有一定的下调作用,但对MM-2/9的表达呈上调趋势。(4)青蒿琥酯的作用机制可能是:通过降低TIMP-1和TIMP-2的表达,一定程度上解除了TIMP-1/2对MMP-2/9的抑制作用,有助于IV性胶原和ECM的降解,抑制ECM的分泌,减轻肺纤维化。