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苯二氮卓类作为镇静剂及抗应激药物近年来被非法添加到动物饲料中,用于加速动物的育肥,在动物性食品中的残留会危害人体健康,中国农业部禁止在动物饲料中添加苯二氮卓类药物如硝西泮,地西泮和奥沙西泮等。目前国内关于苯二氮卓类残留快速检测技术的研究较少,本研究运用地西泮完全抗原制备单克隆抗体,并用此单克隆抗体初步建立了苯二氮卓类药物的间接竞争ELISA检测方法。获得灵敏度高、效价高的单克隆抗体是ELISA检测方法方法建立的前提条件之一。比较不同类型的碳纳米管（羧基多壁短碳纳米管、羧基单壁长碳纳米管、多壁短碳纳米管、单壁长碳纳米管）对BSA的吸附率,结果表明单壁长碳纳米管在5 mg/mL浓度时吸附率可达到94.8%,优于其它三种。用弗氏佐剂与不同浓度的单壁长碳纳米管分别对BALB/c小鼠免疫注射,测定血清中的抗体效价。结果表明,与弗氏佐剂相比,达到相同的效价范围（1:80001:16000）,2.5 mg/mL单壁长碳纳米管仅需一半剂量的地西泮-牛血清白蛋白（DZP-BSA）,并且还可减少小鼠皮肤掉毛溃烂和应激死亡,但单壁长碳纳米管免疫组制备的抗体对地西泮半抗原的亲和力不强,抗体水平弱,不适合建立ELISA检测方法。选取弗氏佐剂组小鼠的免疫脾细胞与骨髓瘤细胞（1:5）进行融合,亚克隆3次后得到分泌苯二氮卓类单克隆抗体的细胞株,命名为4G6A5E9C7,制备的单克隆抗体在30种苯二氮卓类药物中对地西泮、甲硝西泮、替马西泮、氟硝西泮、2-羟乙基氟西泮、四氢西泮、阿普唑仑、普拉西泮7药物有明显的交叉反应。用此单克隆抗体建立的间接竞争ELISA检测方法,灵敏度为1.67 ng/mL。对猪尿样品进行检测,该方法的检测限为0.08 ng/mL,批内回收率（79.36%95.61%）和批间回收率（75.85%103.78%）均在70%120%范围内,批内变异系数（4.78%6.79%）和批间变异系数（6.05%9.38%）在15%以内,达到ELISA检测的基本要求,为苯二氮卓类ELISA快检试剂盒的研制奠定基础。