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生物芯片技术的问世和迅猛发展给生命科学、医学、化学、新药开发、司法鉴定、食品和环境卫生监督等领域带来了一场革命。生物芯片的探测机理与方法已成为各国科学家关注的重要研究方向。并行探测、小型化是生物芯片探测系统发展的必然趋势。基于微机电系统(MEMS)工艺的小型化系统,虽然结构紧凑、性能稳定,但工艺难度大,而多通道并行结构工作效率高,无需扫描,且结构简单,易于推广。本论文提出一种基于达曼光栅的并行共焦荧光探测系统。论文对并行共焦荧光探测的原理、光学系统和仪器设计以及性能测试等方面开展了一系列的研究,主要内容包括:
提出了基于达曼光栅的并行共焦荧光探测的原理,推导并论证了该系统多通道的共焦特性。完成了原理样机的仪器总体设计、光学镜头和机械结构设计、以及原理样机的装调与性能测试。对几种生物芯片样品进行了实验研究,表明并行共焦荧光探测原理正确,效率高,完全适用于生物芯片的探测。设计并研制了中等数值孔径的多通道成像物镜组,在优化设计中,兼顾各通道光强分布与成像质量的均衡,并提出了预标定/归一化信号处理方法,解决多通道系统性能不一致的影响(包括达曼光栅加工误差、CCD不均匀性、镜头的象差等),以确保全视场各通道荧光探测的准确可靠。
提出了虚拟共焦针孔阵列方案,解决了一般多通道系统只能做到准共焦的难题。虚拟共焦针孔阵列完全实现了共焦针孔的功能与作用,抑制背景噪声、提高探测对比度;与准共焦探测系统相比,荧光探测的质量明显提高。该方案的优点是针孔阵列的间距和针孔尺寸易于调整,克服了成百上千个针孔的位置无法与实际成像点对准的困难;虚拟共焦针孔阵列实际上与面阵探测器合为一体,避免了实际针孔的衍射扩展效应,具有最佳的共焦探测效果。
基于达曼光栅的并行共焦荧光探测系统具有探测灵敏度高,速度快,结构简单,成本低廉等优点,将在DNA阵列芯片及其它生物芯片的生化反应荧光探测中有广泛的应用前景。该系统还适用于三维显微成像和面形检测。