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目的:本实验选择乳腺浸润性导管癌组织及乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MCF-7,通过降低或升高细胞中Gab2(Grb2-associated binder protein 2,Gab2)蛋白表达,检测Gab2蛋白、基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteinases,MMPs)及上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)标记物的表达,探讨Gab2蛋白在乳腺癌侵袭转移中的作用及机制,从而为临床控制乳腺癌的侵袭转移提供实验依据。方法:采用免疫组织化学SP法检测80例乳腺浸润性导管癌组织及癌旁正常乳腺组织(>5cm)中Gab2蛋白表达并分析其表达与乳腺浸润性导管癌临床病理参数的关系;检测乳腺浸润性导管癌组织中Gab2、基质金属蛋白酶-2(Matrix metalloproteinases-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(Matrix metalloproteinases-9,MMP-9)及上皮-钙粘素(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达情况并分析其相关性。采用Western blot检测乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MCF-7中Gab2蛋白的表达情况;分别采用小RNA干扰质粒瞬时转染乳腺癌细胞系MDA-MB-231和过表达质粒瞬时转染乳腺癌细胞系MCF-7,Western blot检测两个细胞系转染成功后各组细胞中MMP-2和MMP-9、E-cadherin和Vimentin蛋白的表达情况;Transwell体外侵袭实验检测各组细胞侵袭能力的改变;用EGF刺激各组细胞后,采用Western blot检测各组细胞Akt、ARK5及GSK-3β的磷酸化水平和转录因子Snail转核情况。结果:乳腺浸润性导管癌组织中Gab2蛋白的阳性表达率明显高于癌旁正常乳腺组织(P=0.002);Gab2蛋白表达与ER、乳腺癌组织学分级及腋窝淋巴结转移相关(P=0.013,P=0.016,P=0.027),且其表达与MMP-2、MMP-9和Vimentin蛋白表达呈正相关(P=0.001,P=0.001,P=0.026),与E-cadherin蛋白的表达呈负相关(P=0.030)。Gab2蛋白在MDA-MB-231细胞系中的表达明显高于MCF-7细胞系中的表达。Western blot检测显示,转染小RNA干扰质粒后MDA-MB-231细胞中Gab2蛋白表达量明显降低,而MCF-7细胞系转染过表达质粒后,细胞中Gab2蛋白表达量明显增加,表明两种细胞系均转染成功。敲低Gab2蛋白表达后,MDA-MB-231细胞穿过Transwell小室基质膜细胞数明显减少(P=0.012),并伴有MMP-2、MMP-9和Vimentin蛋白表达降低(P=0.001,P=0.000,P=0.004),E-cadherin蛋白表达升高(P=0.000)。相反,Gab2蛋白高表达后,MCF-7细胞穿过基质膜细胞数明显增加(P=0.007),同时MMP-2、MMP-9和Vimentin蛋白表达升高(P=0.001,P=0.000,P=0.002),而E-cadherin蛋白表达降低(P=0.000)。用EGF刺激各组细胞后,Western blot结果显示:敲低Gab2蛋白表达后MDA-MB-231细胞中Akt、ARK5及GSK-3β的磷酸化明显受到抑制,Snail在细胞核中的表达明显下调(P=0.000);相反,Gab2蛋白高表达后,MCF-7细胞中Akt、ARK5及GSK-3β的磷酸化水平明显增高,Snail在细胞核中的表达明显升高(P=0.001)。结论:(1)Gab2在有腋窝淋巴结转移的乳腺浸润性导管癌组织中表达增多,提示Gab2高表达可能与乳腺癌的侵袭转移存在一定关系。(2)Gab2可参与调节Akt-ARK5信号通路,影响MMP-2、MMP-9表达从而促进乳腺癌侵袭转移。(3)Gab2通过影响GSK-3β活性及Snail的转核,诱导乳腺癌细胞EMT发生,进而促进乳腺癌侵袭转移。