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目的(1)研究儿童孤独症发病的高危因素及孤独症儿童的早期发育特征。(2)研究血浆谷氨酸和丫-氨基丁酸浓度变化与儿童孤独症的关系,及其在儿童孤独症易发癫痫病理机制中的作用。(3)通过对Reelin基因上四个单核苷酸多态(SNP)位点rs736707、rs2229864、rs362691、rs2073559的检测,探讨Reelin基因多态性与儿童孤独症的关系。方法(1)共入组儿童孤独症核心家系278例及正常对照儿童核心家系200例,调查一般人口学资料、母孕期情况、围产期情况、发育性标志出现时间、养育情况、既往史、家族史及体格检查情况;对于孤独症儿童,尚需调查早期症状表现、评定儿童孤独症评定量表(CARS)及孤独症行为检查量表(ABC)。(2)27例伴癫痫的孤独症患者作为观察组,30例不伴癫痫的孤独症患者为另一观察组,36例正常儿童作为对照组。采用高效液相色谱法测定三组血浆谷氨酸和γ-氨基丁酸浓度,进行组间比较。(3)在中国汉族孤独症核心家系(孤独症患者234人,父母399人)及正常对照人群(286人)中,检测Reelin基因上四个单核苷酸多态位点rs736707、rs2229864、rs362691、rs2073559,采用TaqMan—PCR的方法确定样本各位点的基因型,进行以核心家系为基础的传递不平衡检验及病例对照的关联研究。(4)采用DNA测序和序列分析的方法,验证TaqMan-PCR等位基因鉴别分析技术的准确性。(5)使用GENEHUNTER(version 2.1)软件对孤独症核心家系进行传递不平衡分析,使用SAS软件包构建单倍体模型,以x~2检验比较组间差异。统计分析采用SPSS14.0软件包,根据资料特征分别进行独立样本t检验、x~2检验、方差分析、Logistic回归分析以及计算暴露因素的优势比(OR值)。结果(1)儿童孤独症先证者中男性233人,女性45人,男女比例为5.18:1;患者起病年龄为22.36±8.29月。家长感觉到孩子异常最早是在10个月时,最晚在48个月。(2)与正常儿童相比,孤独症患者的多项围产期和母孕期高危因素差异具有显著性。Logistic回归发现:母亲受教育年限(P=0.009)、父亲生育年龄(P=0.001)、家庭负担(P=-0.001)、抚育者(P=0.001)、妊娠反应(P=0.025)、孕期服药史(P=0.014)、分娩方式(P=-0.045)、养育方式(P＜0.001)、主要教导者(P＜0.001)、阳性家族史(P=0.002)进入回归方程。(3)计算回归方程中有临床意义的6项指标的组间优势比(OR值),从强到弱依次为父亲生育年龄＞30岁(OR=6.715)、家族史阳性(OR=5.798)、孕期服用药物(OR=4.653)、非自然分娩(OR=4.147)、母亲受教育年限＞11年(OR=1.373)、妊娠反应中/重度(OR=1.044)。(4)与对照组儿童相比,孤独症儿童的各项发育性标志出现时间、孤独症早期表现总分、头围等指标,差异具有统计学意义(P＜0.001)。(5)不伴癫痫的孤独症组(A组)血浆谷氨酸浓度为653.95±545.87pmol/L,伴有癫痫的孤独症组(B组)血浆谷氨酸浓度为1608.81±1478.22pmol/L,正常对照儿童(C组)血浆谷氨酸浓度为653.70±589.86pmol/L。A组与B组相比,差异具有显著性(P＜0.05);B组与C组相比,差异具有显著性(P＜0.05);A组与C组相比,无显著性差异(P＞0.05)。A组血浆γ-氨基丁酸浓度为71.46±65.98pmol/L,B组为111.19±85.27pmol/L,C组为70.13±51.36pmol/L。A组与B组相比,差异具有显著性(P＜0.05);B组与C组相比,差异具有显著性(P＜0.05);A组与C组相比,无显著性差异(P＞0.05)。(6)孤独症核心家系单位点SNP传递不平衡分析,四个位点均无显著性差异(P＞0.05);四个位点组成的单倍体中GTCC 5条全部未传递,未传递存在显著性差异,其余各单倍体未发现不平衡传递。对照组样本在四个SNPs多态位点上全部符合H-W平衡。病例对照关联研究中,孤独症组与对照组四个SNPs多态位点基因型及等位基因频率比较均未发现显著性差异(P＞0.05)。孤独症组与对照组单倍体分型比较中,rs362691-rs2073559相邻两位点的CC、CT、GC三种单倍体,每一单倍体频率在两组之间比较,差异均无显著性(P＞0.05);而GT单倍体频率在两组之间差异具有显著性(x~2=5.805,P=0.020)。两组单倍体频率构成具有显著性差异(x~2=9.682,P=0.021)。其余相邻两位点、三位点以及四个位点组合的每一单倍体频率、以及单倍体频率构成均无显著性差异(P＞0.05)。结论(1)儿童孤独症在母孕期、围产期高危因素明显增多,前三位的高危因素分别是父亲生育年龄大于30岁、家族史阳性、孕期服用药物史。(2)孤独症儿童整体发育落后于正常对照儿童,而且在发育过程中具有某些特征性的早期表现,有望被早期识别。(3)血浆谷氨酸/γ-氨基丁酸浓度异常在孤独症儿童中并不具有普遍性,仅在伴有癫痫的孤独症儿童中有异常升高。谷氨酸/γ-氨基丁酸系统功能异常可能是孤独症易发癫痫的病理机制之一。(4)以孤独症核心家系为基础的传递不平衡检验未发现Reelin等位基因的优势传递。病例对照关联研究发现仅rs362691-rs2073559的GT单倍体频率在两组之间存在显著性差异,提示Reelin基因与孤独症无关联。