【摘 要】
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纤维素酶和半纤维素酶是将地球上分布最广、含量最丰富的可再生资源——木质纤维素转化的重要部分。嗜热纤维素酶和半纤维素酶因其自身的特性,在多种行业如饲料、造纸制浆、
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纤维素酶和半纤维素酶是将地球上分布最广、含量最丰富的可再生资源——木质纤维素转化的重要部分。嗜热纤维素酶和半纤维素酶因其自身的特性,在多种行业如饲料、造纸制浆、食品及生物质能源方面有着更广泛的运用。本论文一方面对嗜热真菌Neosartorya fischeri P1分泌的不同家族的一系列嗜热纤维素酶和半纤维素酶进行挖掘并通过毕赤酵母表达系统进行高效表达以实现工业应用,另一方面对合适材料的嗜热纤维素酶基因进行改良,提高其pH稳定性或热稳定性以更好的满足工业需求。通过设计特异性引物,我们从嗜热真菌N.fischeri P1的cDNA中获得了一系列不同的嗜热酶基因并成功在毕赤酵母表达系统中进行了高效表达,包括GH5家族的内切葡聚糖酶Eg15A, GH7家族的纤维素酶Ce17A, GH12家族的内切葡聚糖酶Eg112A及GH12家族的木葡聚糖酶Xyg12A。此外,本研究还以GH5家族的内切葡聚糖酶Eg15A为材料,通过分子改良技术,获得了显著提高其pH稳定性和热稳定性的四个单点突变体Q177E、Q261E、Q288E和Q333E。本论文不仅提供了多个不同家族的嗜热纤维素酶和半纤维素酶的工业候选酶,使纤维素酶和半纤维素酶基因资源得到了丰富,而且还通过实验验证了四个与N. fischeriP1来源的GH5家族Eg15A的pH稳定性和热稳定性都相关的可能位点,为同家族纤维素酶的稳定性机制研究提供了良好的研究材料和理论指导。
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