论文部分内容阅读
背景:叉头框C2是肿瘤上皮细胞间质化过程中的一个重要调节因子,其主要通过诱导细胞经历由许多蛋白分子和信号通路介导的上皮间质转化来实现肿瘤的侵袭和转移。目的:以胃癌为研究对象,探索MicroRNA-199a-5p对胃癌上皮细胞间质化过程中关键分子叉头框C2的调控机制,以及对胃癌侵袭和迁移的影响。方法:收集滨医附院30例胃癌病人术后的新鲜胃癌标本,采用实时荧光定量PCR、Western blot等方法检测胃癌组织中的叉头框C2的mRNA、蛋白表达和MicroRNA-199a-5p的表达量,并比较叉头框C2和MicroRNA-199a-5p在胃癌组织与癌旁正常胃粘膜组织中的表达差异。通过体外细胞实验,对胃癌细胞SGC-7901进行转染,敲除或扩增MicroRNA-199a-5p的表达,通过Western blot实验检测转染后细胞中的叉头框C2、上皮细胞间质化过程中的标志蛋白波形蛋白(Vimentin)和E-钙黏蛋白的表达改变。通过细胞的划痕实验和Transwell侵袭实验,检测胃癌细胞侵袭和迁移能力的改变。结果:(1)胃癌组织中Foxc2mRNA和蛋白的表达水平明显高于正常胃粘膜组织,两者之间比较具有统计学意义(P<0.05)。(2)胃癌组织中miRNA-199a-5p的表达水平明显低于正常胃粘膜组织,两者之间比较具有统计学意义(P<0.05)。miRNA-199a-5p在恶性程度高的低分化癌中表达量较高分化癌低,与肿瘤的TNM分期成负相关,分期越晚,其表达量越低,对有淋巴结转移的患者中其表达量较无转移者下降,对于直径>5cm的肿瘤较直径<5cm的其表达量低。miRNA-199a-5p可能参与了胃癌的发生、发展过程,且与肿瘤的侵袭和转移有密切关系。(3)mimic转染组较mimic对照组细胞迁移和侵袭能力明显减弱,而inhibitor转染组细胞的侵袭和迁移能力明显高于inhibitor对照组。miRNA-199a-5p可以明显抑制胃癌细胞的侵袭和迁移。(4)miRNA-199a-5p mimic转染组较mimic对照组细胞中Foxc2蛋白和波形蛋白(Vimentin)的表达明显降低,而E-钙黏蛋白(E-Cadherin)的表达明显升高。反之,miRNA-199a-5p inhibitor转染组较inhibitor对照组细胞中Foxc2蛋白和波形蛋白(Vimentin)的表达明显升高,E-钙黏蛋白(E-Cadherin)的表达则明显降低。(5)叉头框 C2(Foxc2)的 mRNA 为 miRNA-199a-5p 的靶基因,miRNA-199a-5p 可以与叉头框 C2(Foxc2)mRNA 的 3’-UTRs 靶向结合。结论:在胃癌中低表达的microRNA-199a-5p直接靶向作用于胃癌上皮细胞间质化过程中的关键分子叉头框C2(Foxc2),使其表达升高,促进了胃癌的上皮细胞间质转化过程,增加了细胞的侵袭和迁移能力。