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β-甘露聚糖酶(β-1,4-D-mannan mannohydrolase, E.C 3.2.1.78)特异性地水解甘露聚糖类半纤维素,产生大量的甘露寡糖和少量的甘露糖。该酶广泛的存在于植物,动物,微生物中,应用于食品工业、造纸工业、纺织工业和饲料工业中。由于工业生产要求所使用的酶具有较强的稳定性、耐热性,乃至耐酸碱等特性,人们将目光投向高压、高温和特殊pH等极端环境的微生物,以寻求新型酶资源。从海洋微生物中筛选特殊性质的p-甘露聚糖酶的菌株,是开发甘露聚糖酶的一个新方向。本研究从海泥中筛选出一株高活性甘露聚糖酶产生菌,16sDNA序列分析表明,该序列与解淀粉芽胞杆菌的16srDNA序列同源性为100%,将该菌株命名为Bacillus amyloliquefaciens T27。对该菌株产酶条件进行了优化,发现以魔芋粉为碳源,酵母粉为氮源,装液量为50m1,摇速为250rpm,在37℃,培养24小时的条件下,显示出最佳产酶活性,发酵液中粗酶活达到98U/ml。为了进一步研究该菌株甘露聚糖酶的酶学性质,根据芽胞杆菌甘露聚糖酶基因序列设计引物,扩增获得了Bacillus amyloliquefaciens T27的甘露聚糖酶基因。测序结果表明,该基因全长1083bp,编码360个氨基酸,将其命名为Man27T。同源分析结果显示,该基因与芽胞杆菌的甘露聚糖酶同源性最高,属糖苷水解酶家族26。将该酶基因Man27T插入大肠杆菌表达载体pGEX-6p-1上,转化大肠杆菌E.coli(BL21)DE3进行表达,并对重组酶的酶学性质进行了分析,重组酶在pH7.0,40℃条件显示出最高活性,80℃条件下活性仍保持60%以上。在pH4.0-10.0条件下,处理1h活性基本不改变,表明该酶有较宽的pH稳定性。这些特性奠定了进一步研发应用该酶的基础。