论文部分内容阅读
目的:明确Quisinostat对肝癌细胞株的生长抑制效应和凋亡诱导作用。确定Quisinostat凋亡诱导的细胞学机制和分子机制,研究Quisinostat导致细胞周期阻滞的分子机制。确定Quisinostat对肝癌细胞自噬的诱导作用,并确定自噬发生对肝癌细胞的影响方法:CCK-8法和细胞克隆形成实验检测Quisinostat对肝癌细胞生长的作用。流式细胞仪检测Quisinostat对肝癌细胞的细胞周期和凋亡的影响。线粒体膜电位检测确定Quisinostat处理肝癌细胞后线粒体膜电位变化。细胞活性氧检测试剂盒检测Quisinostat处理肝癌细胞后活性氧水平变化。流式细胞仪检测Caspase抑制剂Z-VAD-FMK对Quisinostat诱导的凋亡的影响。Western Blot检测内质网应激标志蛋白BiP/GRP78蛋白的变化。CCK-8法确定内质网应激抑制4-PBA对Quisinostat生长抑制作用的影响。流式细胞仪测定内质网应激抑制4-PBA对Quisinostat凋亡诱导作用的影响。Western Blot检测Quisinostat对细胞内凋亡相关蛋白、细胞周期相关蛋白的影响。Western Blot检测自噬标志性分子的变化。免疫荧光检测Quisinostat对肝癌细胞自噬的诱导作用。自噬抑制剂氯对Quisinostat诱导的生长抑制作用的影响。结论:Quisinostat有效抑制肝癌细胞(Huh7和SMMC-7721)的生长,其效应呈时间-浓度依赖性。Quisinostat有效抑制肝癌细胞(Huh7和SMMC-7721)的克隆形成,其效应呈浓度依赖性。Quisinostat以浓度依赖的方式使肝癌细胞(Huh7和SMMC-7721)细胞周期阻滞于G0/G1期,以及诱导凋亡。Quisinostat主要通过线粒体途径导致肝癌细胞凋亡。Quisinostat诱导肝癌细胞线粒体膜电位下降,同时促进细胞内活性氧浓度增加,促凋亡因子BAX蛋白表达上调,抑制凋亡因子Bcl-2蛋白表达下调,降低Bcl-2/BAX比值,导致下游激酶Caspase 9和激酶Caspase-3的激活,从而导致细胞发生凋亡。Quisinostat导致肝癌细胞P53蛋白表达增加,是Quisinostat导致肝癌细胞生长抑制和凋亡的重要机制之一。Quisinostat诱导肝癌细胞发生内质网应激,但内质网应激反应主要起细胞保护作用,而不是凋亡的主要途径。Quisinostat通过上调细胞周期负性调控因子P21和P27的表达,抑制Cyclin D1蛋白表达,实现其周期阻滞作用。Quisinostat诱导肝癌细胞发生自噬,该种自噬具有细胞保护效果。