昆布提取物J201抑制人胚肺成纤维细胞增殖的研究

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目的 研究昆布提取物J201(Okam J201)对人胚肺成纤维细胞(human embryonic pulmonary fibroblast,HPF)增殖的抑制作用,观察其对DNA、蛋白质合成的影响,对血小板源性生长因子(Platelet Derived Growth Factor,PDGF)促增殖及转化生长因子(transforming growth factor beta1,TGF-β1)凋亡抑制作用的影响,初探J201体外抗纤维增殖机制。 方法 采用HPF体外培养的方法。首先观察J201在0.1μg/ml,1μg/ml,10μg/ml,50μg/ml,100μg/ml五个浓度下对HPF增殖的影响,并与对照组相比。MTT法测定吸光度(A值)代表细胞增殖活性。流式细胞仪检测J201对HPF DNA和蛋白质合成的影响并与对照组比较。其次,采用PDGF介导的HPF增殖模型,实验分正常对照、PDGF组、PDGF+J201组,分别比较不同浓度J201(10μg/ml和100μg/ml)对同一浓度PDGF(50ng/ml)诱导HPF增殖的影响和同一浓度J201(100μg/ml)对不同浓度PDGF(25ng/ml、50ng/ml、75ng/ml、100ng/ml)诱导的HPF增殖的影响。此外,MTT法观察TGF-β1对HPF增殖活力的影响。最后,乏血清培养条件下诱导HPF凋亡,流式细胞术观察TGF-β1对HPF凋亡的抑制,及不同浓度J201(10μg/ml、50μg/ml、100μg/ml)对TGF-β1凋亡抑制作用的影响。 结果 J201在0.1μg/ml时无抑制作用,在1μg/ml以上呈一定剂量依赖性的增殖抑制作用,在100μg/ml浓度时对HPF的抑制率达56.02%(P<0.01)。J201使HPF停滞于G0/G1期,DNA和蛋白合成受抑制。与正常对照相比,PDGF在50ng/ml时对HPF有促增殖作用(P<0.05),J201在10μg/ml、100μg/ml浓度下对PDGF介导的HPF增殖有抑制作用(P<0.05),抑制率分别为18.8%、25.2%。J201对HPF的增殖抑制作用随PDGF浓度升高而减弱,至PDGF达到100 ng/ml时失去抑制。TGF-β1对HPF增殖活力无显著影响;HPF在乏血清培养的条件下出现凋亡,凋亡率为20.97±1.76%,10ng/ml TGF-β1使HPF凋亡减少,凋亡率下降(P<0.05),J201能够阻断TGF-β1对成纤维细胞的凋亡抑制作用,加药组HPF凋亡明显增加中文摘要(P(0.01),10 pg/ml、50 pg/ml、100 pg/m的J201分别使HPF凋亡率增加至8.09土1.45%、14.51土2.44%、20.01土4.61%,凋亡率的增加与J201呈一定的剂量依赖性。 结论昆布提取物J201对HPF的增殖有抑制作用,能够抑制HPF DNA和蛋白质的合成;J201能抑制PDGF诱导的HPF的增殖,能够阻断TGF一p对HPF的凋亡抑制作用。J201在体外初步显示出抗纤维增殖的活性。
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