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本试验从安徽、湖南、湖北分离到新近流行的的五株狂犬病毒(RABV)街毒株,分别编号为AHFY04-04、AHFY04-09、WG430、WG432、HN06。对五株的N基因和其中四株的G基因进行了扩增和测序,得到五株完整N基因编码序列、三株完整G基因编码序列和一株部分G基因编码序列。五株街毒之间N基因同源性在98.1~99.9%之间;G基因同源性在98.5%~99.4%之间,表明所分离毒株之间亲缘关系较近。比较N基因推导氨基酸序列,同源性在99.5~100%之间;G基因推导氨基酸序列,同源性在99.6%~100%之间。
将五株街毒株的序列和国内外已发表毒株相应基因核苷酸和推导氨基酸的序列进行比较和分析。N基因核苷酸和推导氨基酸同源性分别在86.2%~89.6%和95.1%~99.1%之间;G基因核苷酸和推导氨基酸同源性分别在82.8%~91.0%和88.0%~95.1%之间。
将三株街毒株WG430、WG432和HN06与人用疫苗aG株、CTN株、PV株、PitmanMoore株和兽用疫苗ERA株的G基因进行核苷酸序列比较,同源性介于82.8~87.1%之间,推导氨基酸同源性在88.0~92.0%之间,差异非常明显。三株街毒与CTN之间N和G基因同源性均高于与aG株、PV株、PitmanMoore株和ERA株的同源性。
五株街毒株N蛋白上重要抗原位点均无变化,Th细胞表位中第397位氨基酸在AHFY04-04与AHFY04-09发生了变化。三株街毒株G蛋白上主要抗原位点中仅在332上位发生了变化,糖基化位点均包含37和319两个,与致病性相关位点及嗜神经位点上的氨基酸均无改变。
本实验还对三个代次的人用疫苗CTN-1-V株的N和G基因进行了扩增和测序,三代CTN-1-V疫苗株N基因核苷酸和推导氨基酸的同源性均为100%,G基因核苷酸的同源性在99.7%以上,推导氨基酸的同源性也都在99.2%以上;将三代CTN-1-V株与固定毒CTN比较,N基因核苷酸同源性都为99.6%,推导的氨基酸同源性都为99.8%,G基因核苷酸同源性皆为98.5%,推导氨基酸同源性都为96.2%。同CTN相比较,三代CTN-1-V株N基因上抗原位点均无变化,G基因上抗原位点,在第40位上CTN-1-V35株为E,CTN为G;在333位上三代CTN-1-V株为R,CTN则为Q,其它位点均相同。
试验结果对狂犬病毒的分子流行病学研究、致病机理以及评价现有疫苗的适用性,筛选能提供更好保护作用的疫苗株,开发基因工程疫苗等都具有重要的指导意义。