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目的:前期的实验已证实心肌细胞培养液在体外能抑制鼻咽癌细胞的生长,推测心肌细胞培养液中可能含有某种(些)抑制肿瘤生长的物质,这种(些)物质对肿瘤细胞的生长有特异性的抑制作用,对正常细胞却没有影响。本实验拟通过心肌细胞培养液(CMCM)、乳鼠心肌细胞裂解液(CMCLnr)及成年大鼠心肌细胞裂解液(CMCLar)对S180小鼠移植瘤生长影响的实验研究,了解心肌低分子抑瘤物在体内是否仍具抑瘤作用。
方法:
1、采用酶解法原代培养新生Wistar大鼠心肌细胞,细胞达到对数生长期后更换新鲜培养液,继续培养24h后收集上清液即心肌细胞培养液,同理收集其传代培养液;采用反复冻融法裂解乳鼠心肌细胞,充分裂解后,以3000转/分离心30min,弃去沉淀,取上清液即乳鼠心肌细胞裂解液;同法制备成年大鼠心肌细胞裂解液。上述三种心肌低分子天然抑瘤物制备完成后,以截留量10KD的超滤离心管(4000转/分,10min)离心,收集分子量小于10KD的滤液,用0.22um的滤膜过滤除菌后冷冻干燥成干粉,-20℃保存备用。
2、采用细胞悬液接种法建立S180小鼠移植瘤模型,将体外培养的S180细胞制成1×105/ml细胞悬液,无菌条件下于每只小鼠右前腋下接种0.2ml S180细胞悬液。小鼠接种S180细胞24h后随机分成11组,每组10只。阴性对照组:腹腔注射生理盐水(25ml/kg,约0.5ml/只),每日一次,连续14日;阳性对照组(顺铂组):腹腔注射顺铂(2mg/kg,溶于25ml/kg的生理盐水),隔日一次,共7次;其他各组:心肌细胞培养液、乳鼠心肌细胞裂解液、成年大鼠心肌细胞裂解液,各分30mg/kg、60mg/kg、90mg/kg三个剂量组(溶于25ml/kg的生理盐水),共9组,按相应剂量腹腔注射,连续14日。观察肿瘤接种成活率、肿瘤出现时间,待肿瘤长出后每3日测肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线,所有小鼠于第15天处死,称小鼠体重,比较各组小鼠体重增加有无差异,并剥离肿瘤称瘤重。计算抑瘤率。
结果:各组小鼠移植瘤接种成活率均为100%。各组的肿瘤出现时间的差异具有显著性意义(F=6.476,P=0.000<0.001),CMCM、CMCLnr和CMCLar肿瘤出现时间分别为7.20±1.03天、7.30±0.82天及7.30±0.67天,顺铂组的肿瘤出现时间最晚,为7.70±0.82天,与各实验组的差异无统计学意义(P>0.05);生理盐水组的肿瘤出现时间明显比各实验组早,为5.90±0.88天,与其它各组比较肿瘤出现时间的差异均具有统计学意义(P<0.05);三组不同的心肌低分子抑瘤物之间分别两两比较,其肿瘤出现时间的差异均无统计学意义(P>0.05)。各组S180小鼠移植瘤体积在实验期间均逐渐增大,9天以后各组肿瘤体积的差异具有统计学意义(F=28.885,P<0.001),12-15天最为明显,从生长曲线可以看出,生理盐水组生长曲线较其他各组明显陡直,其余各组均较平缓。小鼠处死后立即剥离移植瘤称重,结果发现各组瘤重之间差异具有显著的统计学意义(F=46.643,P<0.001),CMCM、CMCLnr、CMCLar的瘤重分别为0.4493±0.1168g、0.4981±0.1059g及0.4652±0.1158g,抑瘤率分别为68.82%、65.44%、67.72%,顺铂组瘤重最小,平均为0.2705±0.1102g,抑瘤率为81.23%,生理盐水组瘤重最大,平均为1.4412±0.4257g,生理盐水组与其余各组比较,瘤重的差异具有统计学意义(P<0.001);CMCM、CMCLnr及CMCLar三组分别与顺铂组比较,其瘤重差异亦有统计学意义(P<0.05),CMCM、CMCLnr及CMCLar三组之间分别进行两两比较,其瘤重差异均无统计学意义(P>0.05)。比较观察不同剂量心肌低分子抑瘤物对小鼠移植瘤及小鼠的影响,采用析因方差分析,各组肿瘤出现时间的差异无统计学意义(F=0.202,P=0.990,P>0.05);各组瘤重的差异无统计学意义(F=0.674,P=0.713,P>0.05);各组小鼠自身体重增加的差异亦无统计学意义(F=0.940,P=0.448,P>0.05)。实验前各组小鼠体重差异无统计学意义(F=0.064,P>0.05);实验结束后,各组小鼠体重均有增加,各组小鼠体重的差异有统计学意义(F=42.463,P<0.001),各组小鼠体重增加的差异亦有统计学意义(F=92.733,P<0.001),但两两比较中,以生理盐水组为对照,实验结束后小鼠体重及小鼠体重增加两项指标,CMCM、CMCLnr、CMCLar与生理盐水组的差异均无统计学意义(P>0.05),且CMCM、CMCLnr、CMCLar三组之间分别进行两两比较,其差异均无统计学意义(P>0.05),而顺铂分别与生理盐水组及CMCM、CMCLnr、CMCLar比较比较,两项指标的差异均有统计学意义(P<0.05)
结论:分子量小于10kd的CMCM、CMCLnr及CMCLar在小鼠体内均能抑制S180肿瘤细胞的生长,且对小鼠的正常生长无明显影响,是一种安全有效的抑瘤物质,各剂量组之间无明显量效关系。