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背景甲氨蝶呤(methotrexate, MTX)作为改变病情抗风湿药(disease modifying anti-rheumatic drug, DMARD)已广泛应用于治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)及其他自身免疫性疾病。MTX可降低RA活动度,延缓、稳定骨质侵蚀的进展。但研究表明仅有约45%-65%的病人有良好的临床反应,10%-30%的病人因各种不良反应而中断治疗。尽管MTX的作用机制目前尚不明确,但被认为与叶酸依赖的酶抑制有关,如二氢叶酸还原酶(dihydrofolate reductase, DHFR)、5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(methylenetetrahydrofolate reductase, MTHFR)、胸腺嘧啶核苷酸合酶(thymidylate synthase, TYMS)等。人类MTHFR基因定位于1p36.3,整个编码区长1980bp,包含11个外显子和10个内含子,研究发现MTHFR基因存在数种单核苷酸多态性(single-nucleotide polymorphism, SNP)标记:rs1801133C/T, rs1801131 A/C, rs2274976A/G, rs2066462 C/T, rs4846051 C/T等。目前国内外有关MTHFR基因多态性与MTX疗效及不良反应的关系的研究主要集中在前两种SNPs,并且研究结果报道不一致,原因可能与种族差异、地域纬度、多基因遗传、样本量大小、研究方法等因素有关。因此本研究拟采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction, FQ-PCR)方法检测皖籍汉族RA患者及正常对照组MTHFR rs1801133C/T, rs1801131A/C, rs2274976A/G, rs2066462C/T 4个位点的基因型,以了解以上4种SNPs在皖籍汉族RA患者及正常人群中的分布情况,并探讨其单核苷酸多态性与RA患者MTX治疗的关系。从而为预测MTX疗效及不良反应、指导临床用药提供帮助。目的探讨MTHFR rs1801133C/T, rs1801131A/C, rs2274976A/G, rs2066462C/T单核苷酸多态性在皖籍汉族RA患者及正常人群中的分布情况。同时探讨以上4种SNPs与RA患者MTX疗效和不良反应的关系。方法收集皖籍汉族RA患者110例,均符合美国风湿病学会1987年RA分类标准并且均为活动期RA患者,关节功能II-III级,均口服MTX10-15mg/W。观察治疗0周、12周、24周临床症状及实验室指标变化,评价疗效及不良反应。同时收集180例皖籍汉族健康人群作为正常对照组。采用实时荧光定量PCR方法检测MTHFR rs1801133C/T, rs1801131A/C, rs2274976A/G, rs2066462C/T基因型。比较各位点单核苷酸多态性分布在RA组和正常对照组间有无差异,并分析其多态性与MTX疗效及不良反应的关系。结果1. MTHFR rs1801133T, rs1801131C, rs2274976A, rs2066462T等位基因频率在皖籍汉族RA患者和正常对照组间差异无统计学意义(46.43% vs 45.71%, 17.02% vs 16.29 %, 9.47% vs 10.11%, 6.84% vs 5.93%, P值均大于0.05)。2. RA患者中,MTX治疗有效组的rs1801131C等位基因频率明显高于治疗无效组(20.97% vs 8.06%, p<0.05, OR=3.02, 95%CI: 1.10-8.31)。携带有CC或AC基因型的患者疗效优于携带有AA基因型的患者。3.有不良反应组的MTHFR rs1801133T等位基因频率显著高于无不良反应组(56.38% vs 37.50%, P<0.05, OR=2.15, 95%CI: 1.21-3.85)。携带有CT或TT基因型的患者比携带有CC基因型的患者更易发生不良反应。4. MTHFR rs2274976A等位基因频率在有不良反应组也显著高于无不良反应组(14.89% vs 4.17%, P<0.05, OR=4.02, 95%CI:1.27-12.72)。AG基因型的RA患者使用MTX后不良反应发生率明显高于GG基因型的患者。5. MTHFR rs1801133C/T和rs2274976A/G与MTX不良反应关系的单倍型分析显示:T-A单倍型在有不良反应组显著高于无不良反应组,C-G单倍型在有不良反应组显著低于无不良反应组。而C-A, T-G单倍型在两组间差异无统计学意义。6. MTHFR rs2066462T等位基因频率在有效组/无效组、有不良反应组/无不良反应组间差异均无统计学意义(P值均大于0.05)。结论1. MTHFR rs1801133C/T、rs1801131A/C、rs2274976A/G、rs2066462C/T单核苷酸多态性分布在皖籍汉族RA患者与正常人群之间无差异性,可能与RA发病无相关性。2. MTHFR rs1801131A/C多态性与MTX的疗效相关,携带有CC或AC基因型的患者疗效优于携带有AA基因型的患者。3. MTHFR rs1801133C/T及rs2274976A/G多态性与MTX不良反应相关。在rs1801133C/T中携带有CT或TT基因型的患者比携带有CC基因型的患者更易发生不良反应。rs2274976A/G中AG基因型的RA患者使用MTX后不良反应发生率明显高于GG基因型患者。4.通过对rs1801133 C/T,rs2274976 A/G与MTX不良反应关系的单倍型分析,发现T-A单倍型有可能与不良反应的发生有关,而C-G单倍型有可能降低其不良反应的发生。5. MTHFR rs2066462C/T多态性与MTX疗效及不良反应无关。