【摘 要】
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目的:探讨HER2的表达与乳腺癌细胞紫杉醇耐药性及干细胞标志物的关系。方法:体外培养HER2阳性的乳腺癌细胞(SKBR-3),并将其分为对照组(未处理组)和不同浓度紫杉醇处理组,采用低浓度加量持续诱导法获得对紫杉醇耐药的乳腺癌细胞系(Taxol-resistant cell,TRC),通过倒置显微镜观察对照组及不同浓度紫杉醇处理组的细胞形态及存活率,MTT法检测细胞存活率,流式细胞术检测各组细胞中
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目的:探讨HER2的表达与乳腺癌细胞紫杉醇耐药性及干细胞标志物的关系。方法:体外培养HER2阳性的乳腺癌细胞(SKBR-3),并将其分为对照组(未处理组)和不同浓度紫杉醇处理组,采用低浓度加量持续诱导法获得对紫杉醇耐药的乳腺癌细胞系(Taxol-resistant cell,TRC),通过倒置显微镜观察对照组及不同浓度紫杉醇处理组的细胞形态及存活率,MTT法检测细胞存活率,流式细胞术检测各组细胞中HER2表达水平,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测每组细胞中癌干性基因OCT4的表达,免疫组织化学法检测179例浸润性乳腺癌患者的OCT4阳性表达,Western blot法检测4组细胞中HER2及OCT4的表达。结果:(1)贴壁培养3天后,显微镜下观察细胞存活率,对照组明显高于紫杉醇处理组。(2)MTT法再次显示出不同浓度紫杉醇处理3天后的细胞存活率有较大差异,对照组高于紫杉醇处理组,并随药物浓度增高,细胞存活率呈递减趋势(P<0.05)。(3)流式细胞术检测结果表明对照组与不同浓度紫杉醇处理组的HER2表达水平不同,随药物浓度增加,HER2表达呈递增趋势(P<0.05)。(4)MTT结果体现不同浓度紫杉醇处理4天后的亲代细胞株及SKBR-3紫杉醇耐药细胞系(Taxol-resistantcell,TRC)细胞存活率存在差异,尤其是在5nM及10nM浓度下,TRC的存活率明显高于亲代细胞株,紫杉醇处理5天后,5nM浓度下TRC存活率较前明显高于亲代细胞株,具有显著统计学差异(P<0.01)。(5)逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)结果显示,紫杉醇处理组中癌干性基因OCT4表达水平明显升高,并随药物浓度升高呈递增趋势。(6)免疫组化结果显示179例乳腺癌患者组织中OCT4阳性率为25.1%,其中HER2阳性乳腺癌组织(25例)OCT4表达率为44.0%,表明OCT4的表达与HER2有相关性(P<0.05)。(7)Western blot结果显示沉默HER2表达的SKBR-3/shHER2细胞系中OCT4表达明显降低,而过表达HER2的MCF-7/HER2中OCT4的表达明显上调。结论:(1)SKBR-3乳腺癌细胞的紫杉醇耐药与HER2的表达有关。(2)干细胞相关标记物OCT4的表达与SKBR-3乳腺癌细胞紫杉醇耐药机制密切相关,且其表达与HER2的表达有关。
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