【摘 要】
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牛瑟氏泰勒虫病是由泰勒科、泰勒属的瑟氏泰勒虫(Theileria orientalis)寄生于牛红细胞和淋巴细胞内引起的一种原虫病,以高热、贫血、消瘦和体表淋巴结肿大为主要临床症状。
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牛瑟氏泰勒虫病是由泰勒科、泰勒属的瑟氏泰勒虫(Theileria orientalis)寄生于牛红细胞和淋巴细胞内引起的一种原虫病,以高热、贫血、消瘦和体表淋巴结肿大为主要临床症状。感染该病的牛常常会成为该病的携带者,牛的健康生长和牛类产品的产量和质量均会受到不同程度的影响。MPSP (Major piroplasm surface protein)是牛瑟氏泰勒虫的免疫优势抗原,是牛瑟氏泰勒虫疫苗的候选抗原。本研究根据国内外文献并结合表位分析软件,选择MPSP的2个优势T细胞表位区(E1,E2),运用重叠延伸PCR (SOE-PCR)将2个表位基因串联,克隆至pMD-18T载体,并构建原核表达载体pGEX-4T-E1-E2和真核表达载体pVAX-E’1-E’2,进行原核表达和真核表达,应用Western blot、 IFAT等技术鉴定表达情况。结果显示,SOE-PCR扩增2个T细胞表位片段大小为361bp, Western blot分析原核表达融合蛋白大小为39ku,并具有较好的反应原性;RT-PCR和IFAT检测融合T表位基因在Vero细胞中获得了瞬时表达。在进行原核表达和真核表达的基础上,又进行了动物免疫试验。将48只雌性BALB/c小鼠,随机分为6组(A组为R-融合双表位免疫组,B组为R-MPSP蛋白免疫组,C组为pVAX-E’1-E’2免疫组,D组为pVAX-MPSP免疫组,E组为pVAX1对照组,F组为PBS对照组),每组8只,进行动物免疫试验。应用间接ELISA方法检测免疫BALB/c小鼠的IgG抗体水平,应用IFN-ys IL-4试剂盒检测外周血中细胞因子IFN-γ和IL-4的分泌水平。结果显示,在各项检测中,A组和B组均显著高于F组(IgG抗体和IFN-γ水平,p<0.01;IL-4水平,p<0.05),C组和D组均显著高于E组(IgG抗体和IFN-γ水平,p<0.01; IL-4水平,p<0.05)。本试验为牛瑟氏泰勒虫病新型多表位疫苗的研制奠定了基础。
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