胸腺素β4对体外培养的人晶状体上皮细胞增殖、迁移及上皮间质转分化的影响

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目的:后囊混浊(Posteriorcapsuleopaciftcation,PCO)主要由术后残留的晶状体上皮细胞(lensepithelialcells,LECs)的增殖、迁移及上皮间质转分化(epithelial–mesenchymaltransition,EMT)引起。胸腺素β4(thymosinβ4,Tβ4)是一种重要的肌动蛋白耦联蛋白,参与介导多种生物学反应。本实验通过研究Tβ4对体外培养的人晶体上皮细胞增殖、迁移及上皮间质转分化的影响,探讨Tβ4在PCO防治中的可能作用。方法1.用MTT法检测Tβ4对LECs增殖的影响。用含不同浓度Tβ4(0ng/ml、1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml、1000ng/ml)无血清培养基处理LECs,分别于24h、48h、72h行MTT检测,测量OD值。2.细胞划痕实验及Transwell小室迁移模型观察Tβ4对LECs迁移的影响。(1)划痕后细胞培养基中加入不同浓度Tβ4(0ng/ml、1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml、1000ng/ml)的0.1%牛血清白蛋白DMEM培养基,分别于划痕后0h、24h、48h选取10个随机视野拍照记录划痕间距(前后拍照位置须一致),比较不同时间点不同浓度的平均迁移距离。(2)种细胞于上室,下室为不同浓度Tβ4(0ng/ml、1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml、1000ng/ml)的20%胎牛血清DMEM培养基,作用24h后比较不同浓度穿过小室的平均细胞数目。3.实时定量PCR技术比较处理72h后Tβ4处理组和正常对照组中E-钙粘蛋白及α-SMAmRNA表达水平的变化以检测Tβ4对LECs的转分化作用的影响。结果1.与对照组相比,当浓度为100ng/ml、1000ng/ml时Tβ4能够明显促进LECs的增殖,差异有显著性(P<0.05)。相同药物浓度组随着作用时间的延长促进作用加强,各时间点相互比较差异亦有显著性(P<0.05)。2.24h各浓度组(01000ng/ml)平均迁移距离分别为:329.6621±47.43715μm,354.2761±52.5730μm,453.5897±46.3792μm,499.6127±46.0270μm,555.4763±71.6129μm;48h各浓度组(01000ng/ml)平均迁移距离为:614.6647±97.2274μm,636.1453±649.7268μm,720.5249±41.9510μm,739.9166±85.3627μm,770.9152±62.3144μm。10ng/ml、100ng/ml、1000ng/ml处理组相对于对照组而言,差异有统计学意义(P<0.05),且细胞迁移距离随时间和浓度递增。Tβ4处理24h后,穿过小室的细胞数各组(01000ng/ml)分别为82±3个,109±6个,128±10个,163±5个,204±11个。10ng/ml、100ng/ml、1000ng/ml处理组相对于对照组而言,差异有统计学意义(P<0.05),且细胞迁移能力随浓度递增。3.Tβ4加药处理72h后LECs表达α-SMA、E-钙粘蛋白mRNA水平的变化:加药处理后,α-SMA表达量升高(151.7±5.0)%,E-钙粘蛋白表达量下降(68.0±8.1)%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:胸腺素β4可促进人晶状体上皮细胞增殖、迁移及上皮间质转分化,其在PCO防治中的可能作用值得作进一步研究。
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