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目的观察CD59配体肽SP22对补体介导高表达正常或突变CD59分子的前列腺癌细胞溶解的影响,评估SP22对CD59分子补体结合位点的封闭效果,为提高前列腺癌免疫治疗的疗效探索新的途径。构建SP22基因的真核表达体系,为进一步对SP22的结构进行优化、研究SP22分子与CD59分子的相互作用机制以及探讨利用SP22阻断CD59分子在肿瘤细胞表面的表达奠定基础。方法阳离子脂质体法分别将正常、突变CD59基因(wCD59和mCD59)和pIRES空质粒转染PC-3细胞;G418筛选稳定转染的细胞克隆;荧光免疫组化技术(FIH)和流式细胞术(FACS)检测转染细胞表面CD59分子的表达;RT-PCR检测细胞内CD59mRNA;补体溶解试验观察SP22作用下转染细胞溶解率(LR)的变化;MTT法测定细胞的溶解率。根据SP22的氨基酸序列设计合成两端各含1个NheⅠ或EcoRⅠ酶切位点的SP22基因(SP-dsDNA),与pMD18-T vector连接后转化E.coli.JM109,碱裂解法提取质粒进行DNA测序鉴定。将SP-dsDNA和pIRES质粒分别进行NheⅠ、EcoRⅠ酶的双酶切,纯化回收酶切产物,连接后用TSS法转化E.coli.JM109,利用菌液PCR、质粒双酶切及DNA测序对SP22基因的真核表达质粒进行鉴定。结果FIH、FACS和RT-PCR检测证实wCD59、mCD59成功转染PC-3细胞并表达;FACS和RT-PCR检测发现,wPC-3细胞(转染wCD59基因)和mPC-3细胞(转染突变CD59基因)CD59分子的表达水平没有明显差别,但显著高于pPC-3细胞(转染空质粒)(P＜0.01);在不加SP22的情况下,3种细胞的溶解率(LR)显著不同(P＜0.01),其中pPC-3细胞最高,wPC-3细胞最低;加入SP22后,3种细胞的LR均显著升高(P＜0.01),但升高的模式和幅度显著不同。PCR、酶切及测序结果表明,SP22基因与pIRES质粒正确连接。结论SP22不能与mCD59分子进行结合;但可与PC-3细胞表面的正常CD59分子高效结合进而封闭其补体结合位点,显著增强补体对PC-3细胞的溶解。SP22有希望在提高前列腺癌免疫治疗的疗效中发挥重要作用。SP22基因的真核表达体系构建成功,这为进一步研究利用SP22阻断CD59分子在肿瘤细胞上的表达创造了有利条件。