microRNA-181b-5p在卡波西肉瘤组织中的表达及对细胞SLK生物学功能的影响

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目的:探讨microRNA-181b-5p(miR-181b-5p)在卡波西肉瘤组织中与瘤旁组织中的表达差异情况以及临床意义。通过脂质转染miR-181b-5p模拟物及抑制物到卡波西肉瘤细胞系SLK,首次研究miR-181b-5p对卡波西肉瘤细胞SLK细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭等一系列生物学功能的影响,为进一步研究miR-181b-5p在卡波西肉瘤发病机制中的作用奠定理论基础。方法:(1)对18对卡波西肉瘤及瘤旁正常冰冻组织行定量PCR检测,比较其差异性;对18例卡波西肉瘤患者的临床资料行流行病学调查统计描述;对18对卡波西肉瘤组织及瘤旁组织中miR-181b-5p的表达量在年龄、性别、病理分型、HIV感染、HHV-8感染、HIV合并HHV-8感染、病程、皮损面积、全身皮损类型的差异性进行统计描述;(2)应用脂质体对人卡波西肉瘤细胞株SLK进行转染,通过转染不同浓度的阳性对照测定MTT值确定最佳转染浓度及最佳转染时间,描绘生长曲线;对转染miR-181b-5p模拟物及抑制物后的卡波西肉瘤细胞株行MTT检测观察细胞增殖曲线;应用流式细胞仪行检测转染48小时后各组细胞凋亡率比较;(3)转染miR-181b-5p模拟物及抑制物后应用transwell小室24小时后行苏木素染色观察细胞迁移、细胞侵袭生物学特性。结果:定量PCR结果,miR-181b-5p在卡波西肉瘤中表达明显升高,卡波西肉瘤组比瘤旁组miR-181b-5p的表达量高约3.10倍;miR-181b-5p的相对表达量与年龄、性别、HIV感染、HHV-8感染、HIV合并HHV-8双重感染、病程、皮损面积、全身皮损类型无关,差异无统计学意义,但卡波西肉瘤组织斑片期分别和斑块期、结节期表达量有差异性。MTT法检测显示,最佳转染浓度为94ng/L,最佳转染时间为48小时;与阴性对照组比较,miR-181b-5p模拟物组细胞的增殖能力明显上升,(P<0.01)。miR-181b-5p抑制物组细胞的增殖能力明显下降,(P<0.01)。miR-181b-5p抑制物阴性对照组细胞的增殖能力无明显变化。流式细胞仪测定SLK细胞转染miR-181b-5p模拟物后凋亡率(5.5±0.6)%,与阴性对照组凋亡率(7.6±0.4)%相比,差异有统计学意义,明显下降(P<0.05);miR-181b-5p抑制物组凋亡率(14.8±1.0)%明显增高,有统计学差异(P<0.05)。Transwell小室迁移实验结果显示,与阴性对照组迁移实验下室面细胞数目(151±11)个相比miR-181b-5p模拟物组(184±9)个,细胞数目明显数量增多,迁移能力均明显提高;miR-181b-5p抑制物组(105±10)个,细胞数目明显数量减少;迁移能力均明显降低;差异有统计学意义。Transwell小室侵袭实验结果显示,与阴性对照组侵袭实验下室面细胞数目(35±6)个相比miR-181b-5p模拟物组(48±5)个,细胞数目明显数量增多,侵袭能力均明显提高;miR-181b-5p抑制物组(23±4)个,细胞数目明显数量减少;侵袭能力均明显降低;差异有统计学意义。且观察到卡波西肉瘤细胞的侵袭能力较弱,需要提高细胞数量后才能观察细胞计数。结论:miR-181b-5p可能参与了卡波西肉瘤的致瘤过程,miR-181b-5p有可能成为潜在的分子诊断指标之一;通过转染miR-181b-5p模拟物/抑制物,发现其对SLK细胞的增殖、凋亡、侵袭和迁移能力均造成一定影响,进一步开展miR-181b-5p生物学特性和其相关靶基因验证的相关研究有十分重要的意义。
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