高效液相色谱法在几种中草药中的应用研究

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高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography, HPLC)是现代一种重要的新型分离分析技术,具有分离效能好、检测灵敏度高、分析速度快、适用范围广和操作简便等优点。它是采用高压输液系统将流动相送入色谱柱中,各成分在柱内被分离后,进入检测器进行检测,从而实现对试样的分析。目前,该方法已广泛的应用于食品分析、环境监测、生物工程、制药工业等科学领域。中国是中草药的发源地,中草药中的有效成分是预防治疗疾病的物质基础,.其含量的多少己成为评估中药质量的重要标志。近年来,随着生活水平的不断提高,使得人们“回归自然”的要求日趋强烈,国内外学者对中药中天然成分的研究提出了许多新方法新思路,现代的分析技术也在中药研究中得到广泛的应用。其中,高效液相色谱法(HPLC)是中药质量分析最重要的手段之一样品前处理是色谱分析前的一个重要步骤,由于中药是一个典型的复杂未知样品,各成分的物理化学性质不同,含量相差大,因此,样品前处理技术的先进与否,往往是色谱分析成败的关键。本文由绪论和研究报告两部分组成。绪论部分简单介绍了高效液相色谱法的特点和发展状况、酚类化合物和样品前处理技术的研究进展。研究报告部分建立了虎杖中白藜芦醇的提取测定;高良姜中槲皮素、山奈酚、高良姜素的分离测定;小儿泻速停颗粒中没食子酸、儿茶素、表儿茶素的分离测定;1、胶束萃取-高效液相色谱法测定虎杖中的白藜芦醇以5%(w/v)的非离子表面活性剂Triton X-100为萃取剂,建立了一种简便绿色的胶束提取-高效液相色谱测定虎杖中的白藜芦醇的方法。色谱柱为phenomenex C18(250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-0.25%乙酸等度洗脱,流速0.8mL·min-1,,检测波长306nm。白藜芦醇在0.04~200μg/mL,(r=0.9998)范围内线性关系良好,定性检测限(S/N=3)为9.46ng/mL,加入6%的NaCl来进行浊点富集,可提高萃取回收率,加标回收率为94.47%。2、超声提取-高效液相色谱法同时测定高良姜中的槲皮素、山奈酚、高良姜素建立基于非离子表面活性剂超声提取-反相高效液相色谱法同时分离测定高良姜中槲皮素、山奈酚、高良姜素的方法。方法:采用phenomenex C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相为乙腈-0.25%冰醋酸水溶液,采用梯度洗脱;流速1.0mL/min;检测波长360nm。通过正交实验确定最优提取方案为:在40℃下,100倍量的8%Triton X-100溶液超声提取40min。结果:槲皮素、山奈酚和高良姜素分别在0.0076~76μg/mL,(r=0.9999);0.0064~64μg,mL,(r=1.0000);0.0152~152μg/mL,(r=0.9999)范围内线性关系良好,定性检测限(S/N=3)依次为:7.32ng/mL,1.92ng/mL,1.13ng/mL:结论:该方法简便快速、灵敏度高、成本低、绿色环保,适用于高良姜中黄酮类物质的含量测定,为高良姜中黄酮化合物的的检测及分离提供了一个有效的科学方法。3、胶束萃取-高效液相色谱法测定小儿泻速停颗粒中的多酚类化合物建立了基于表面活性剂胶束萃取-反相高效液相色谱法同时分离测定小儿泻速停颗粒中没食子酸、儿茶素、表儿茶素的方法。方法:采用phenomene×C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相为乙腈-0.2%冰醋酸水溶液,采用梯度洗脱;流速0.8mL/mim检测波长280nm。考察了色谱条件,优化了胶束萃取和浊点富集参数。结果:没食子酸、儿茶素和表儿茶素分别在0.0104~223μg/mL,(r=0.9999);0.0152~108μg/mL,(r=0.9999);0.0184~132μg/mL,(r=0.9999)范围内线性关系良好,定性检测限(S/N)依次为:0.087ng/mL,0.43ng/mL,0.42ng/mL:在优化条件:5%Triton X-100表面活性剂;固液比为1:100(g/mL);在30℃超声萃取30min,萃取率可达到最大。加入5%NaCl来进行浊点富集,可提高萃取回收率。平均回收率为91.85%-98.48%结论:本法简便快速、灵敏度高、成本低、绿色环保,可用于该制剂的质量控制。
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