干细胞具有自我更新能力和多向分化潜能。骨髓间充质干细胞（BMSCs）在体内或体外诱导条件下可向神经细胞分化,还能分泌多种神经营养因子,可作为中枢神经系统移植治疗的种子细胞。有研究表明,BMSCs长期体外培养后,增殖、分化能力逐渐丧失。这会影响移植细胞的数量和质量,制约移植治疗的开展。 本研究拟通过阳离子脂质体介导的人端粒酶逆转录酶催化亚单位（hTERT）表达载体转染,建立大鼠BMSCs永生化细胞系,并对体外培养条件下永生化BMSCs的增殖及神经细胞方向分化能力进行检测,同时对BMSCs的生长变异及其应用安全性进行初步评估。在此基础上,借助大鼠液压冲击脑损伤模型,检测创伤性脑损伤（TBI）后永生化BMSCs同种异体脑内移植的长期存活、分化情况,为永生化干细胞走向临床提供实验依据。 第一部分 大鼠BMSCs的分离培养与鉴定 目的:分离、培养大鼠BMSCs,检测其表面标记及Nestin表达。 方法:SD大鼠处:死后,分离双侧股骨和胫骨,剪开长骨两端骨皮质,露出骨髓腔,用含10%FBS的低糖DMEM培养基反复冲洗骨髓腔,收集细胞悬液,接种到10cm塑料培养皿,37℃、5%CO₂、饱和湿度条件下细胞培养箱中培养。至10～14天单层贴壁细胞接近90%汇合时,0.25%胰蛋白酶消化,1:2传代。以后随细胞扩增均于80～90%汇合时按1:2持续体外传代培养。 体外培养细胞至第5代,接近90%汇合时,消化收集细胞,取约1×10⁶个细胞悬于100μl PBS中,分别加入适量FITC标记CD29、CD31、CD44、CD45、