论文部分内容阅读
GL50分子是新近发现的B7家族成员,为一个由309个氨基酸组成的Ⅰ型跨膜糖蛋白,约45~72kDa,胞外区与B7家族其它分子相似。人GL50分子最早是1999年,由Swalow M.M.等分别从经TNF活化的小鼠胚胎母细胞系和3T3细胞中克隆得到的。因为它与APC上B7分子同源,故命名为B7h。随后Ling等在基因组数据库中筛选与B7家族基因相似的基因,获得了KIAA0653(Accession Number:AB014553,Ref.12)的cDNA。该cDNA分子约3.4kb,定位于21号染色体上。人GL50可持续表达在B淋巴细胞、巨噬细胞表面和心脏、骨骼肌、肺等组织上。GL50分子与其特异性受体ICOS(Inducible Costimulator)的相互作用,在机体再次免疫应答过程中T细胞的增殖、活化、分化、细胞因子的分泌以及B细胞的增殖、分化、抗体分泌等方面发挥着重要的作用。目前的研究证明:GL50/ICOS信号途径在机体炎症、自身免疫性疾病、肿瘤和移植排斥等免疫应答过程中发挥着重要的调节作用。对该信号途径的有效调节将不仅为理解人体复杂、精细的免疫应答提供新的视角,而且还具有潜在的临床应用前景。 本研究拟在已经成功构建一株ICOS转基因细胞ICOS-L929,并制备获得了一株能稳定分泌功能型鼠抗人GL50单克隆抗体的杂交瘤细胞株11C4的工作基础上,进行如下研究: 1.GL50分子在活化T细胞上的表达 将人外周血T细胞用PHA或联合抗CD3和抗CD28单抗激发后,分别于0h、24h、48h、72h、96h用免疫荧光标记和流式细胞术分析,检测细胞表面GL50分子和ICOS分子的动态表达,结果显示:GL50分子的表达在T细胞活化后24h即开始上调,72h时达到高峰;而ICOS分子的表达在T细胞活化48h时达到高峰,由此表明:GL50和ICOS分子共表达于活化T细胞表面,并且两者的表达在时相上存在差异性。在此基础上,本研究进一步用western blot以及real-time PCR等方法从蛋白和