各种离子和生物蛋白在大管电泳中分离技术的研究

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毛细管电泳技术具有高效、快速、样品用量少、操作模式多样化、易于与质谱技术相连等特点和优势,已在分析化学、生物技术、制药和医学等领域得到广泛应用,尤其在生物大分子的分离分析领域发挥着重要的作用。由于焦耳热问题的存在,目前常用50μm或75μm的小内径毛细管作分离通道,细内径分离通道的采用,使得载样量比较少,同时检测灵敏度相对比较低,对于低含量目标组分的检测具有一定的挑战性,对其进一步分析存在一定的限制,所以如何从根本上解决载样量低的问题成为拓宽毛细管电泳技术应用领域的技术瓶颈。本论文在前期基础上,构建了一套大管电泳系统,采用内径为1000μm的石英管为分离通道,大内径石英管的采用,使得载样量大大增加,同时检测灵敏度也相应得到提高,系统中引入了内制冷机制,及时、有效地解决了焦耳热的问题。本实验中首先采用区带电泳模式对大管系统的分离性能做了一系列的评价,通过对缓冲溶液pH值、浓度、内制冷水流速和温度、添加剂浓度、分离电压的选择和优化,成功实现了对六种有机酸、三种有机碱和生物大分子的分离,并且在优化后的实验条件下考察了实验结果的重现性,取得了满意的结果。随后将大管区带电泳应用于实际样品的分析中,测定了酱油中防腐剂的含量。毛细管等点聚焦技术在蛋白质分析中发挥着重要的作用,实验中将毛细管等电聚焦模式转移至大管系统中,为了得到较好的分离结果,首先对一系列的实验条件进行了优化,包括最佳检测波长的确定、分离电压、进样体积,冷却液的温度和流速、两性电解质的选择、浓度及其配比、各种添加剂的浓度等。在优化的实验条件下,成功分离了中性蛋白、酸性蛋白和碱性蛋白,建立了大管等电聚焦模式分离蛋白质的方法,证明了等电聚焦模式在大管系统中的可行性。
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