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【目的】:课题组前期利用各种分子生物学技术分别上调和下调人乳腺癌MCF-7细胞株中的Rab25基因表达,构建了一系列Rab25基因表达水平不同的人乳腺癌MCF-7细胞株,复苏各研究系列细胞并扩大培养后,逆转录PCR定性检测Rab25的表达,通过检测各研究系列人乳腺癌细胞的增殖活性及对裸鼠的致瘤能力,探讨Rab25基因不同水平的表达对人乳腺癌细胞多种生物学活性的影响。【方法】:1.复苏课题组前期构建的Rab25基因表达水平不同的人乳腺癌细胞株,包括原株MCF-7组、转染重组质粒pDNR-Dual-Rab25 MCF-7细胞组,转染Rab25siRNA MCF-7细胞组以及转染pDNR-Dual空质粒组(以下简称:原株组、转染组、干扰组及空质粒组),扩大培养。2.普通PCR检测各实验组细胞中Rab25的实际表达情况。3.MTT法检测各研究系列乳腺癌细胞增殖活性。4.收获各研究系列处于对数生长期的细胞,种植至裸鼠皮下,密切观察至40天,记录细胞致瘤情况。5.实时荧光定量PCR体系检测各实验组裸鼠瘤体中Rab25mRNA表达情况。【结果】:1.培养原株MCF-7、转染组及空质粒组细胞在光镜下观察形态无明显差异,呈单层生长,形态规则,细胞呈多角形或长梭形,胞核呈圆形或椭圆形,胞浆透亮。干扰组细胞则呈不规则形,细胞胞体增大,细胞间隙变宽,胞浆透亮度下降,细胞树突增多变短粗,细胞贴壁程度下降,表明细胞生长活动呈下降趋势。2.Rab25基因在人乳腺癌原株MCF-7细胞、转染组及空质粒组细胞中均有表达,而干扰组中无表达。3.转染组MCF-7乳腺癌细胞增殖活性较Rab25干扰组、原株细胞组及空质粒组有明显增强,差别有统计学意义(p<0.05)。4.成功建立裸鼠乳腺癌移植瘤模型,通过监测移植瘤体积变化建立其生长曲线,各组裸鼠移植瘤体积随时间的增加而增大,转染组肿瘤体积较其他三组明显增大,差别有明显统计学差异(p<0.01)。分别取各组最终移植瘤称重,转染组瘤重较原株组和空质粒组明显变大,而干扰组瘤重较原株组和空质粒组明显减轻,差别均有明显统计学意义(p<0.01),原株组与空质粒组移植瘤瘤重比较,差别无统计学意义(p>0.05)。提示转染组较Rab25干扰组、原株细胞组及空质粒组裸鼠细胞致瘤能力明显增强。5.通过实时荧光定量PCR检测发现转染组裸鼠瘤体中Rab25 mRNA表达明显增强,而干扰组瘤体Rab25 mRNA表达明显减弱,采用双标准曲线法相对定量测定后转染组Rab25 mRNA表达为原株组的4.986倍,而干扰组Rab25 mRNA表达仅为原株组的0.082倍。【结论】:1.Rab25基因在人乳腺癌细胞原株MCF-7细胞组、转染重组质粒pDNR-Dual-Rab25 MCF-7细胞组及转染pDNR-Dual空质粒组中均有表达,转染Rab25siRNA MCF-7细胞组中无表达。2.研究发现各研究系列的人乳腺癌细胞株的增殖活性和对裸鼠的致瘤能力随着细胞内Rab25基因表达水平的上调而增强,随着Rab25基因表达水平的下调而减弱,表明Rab25基因在人乳腺癌细胞中发挥着促进癌细胞生长、增强其增殖及侵袭的作用。本研究结果为拓展乳腺癌相关癌基因在该领域的基础研究及临床应用提供了新的研究因素和思路。