【摘 要】
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葫芦素广泛分布于葫芦科属植物中,生物活性强,在提高细胞免疫机能,保肝、护肝等方面具有一定作用。临床医学上用于治疗慢性肝炎,尤其在肝癌方面具有辅助治疗的功效。黄瓜是葫芦科一年生植物,目前在中国种植广泛。黄瓜含有丰富的营养成分,黄瓜叶片则主要用于中药治疗儿童腹泻和痢疾。本论文以葫芦科甜瓜属黄瓜的鲜嫩叶为材料,进行黄瓜嫩叶中葫芦素的制备工艺以及纯化工艺的优化,并利用微生物实验探究葫芦素对细菌生长的抑制情
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葫芦素广泛分布于葫芦科属植物中,生物活性强,在提高细胞免疫机能,保肝、护肝等方面具有一定作用。临床医学上用于治疗慢性肝炎,尤其在肝癌方面具有辅助治疗的功效。黄瓜是葫芦科一年生植物,目前在中国种植广泛。黄瓜含有丰富的营养成分,黄瓜叶片则主要用于中药治疗儿童腹泻和痢疾。本论文以葫芦科甜瓜属黄瓜的鲜嫩叶为材料,进行黄瓜嫩叶中葫芦素的制备工艺以及纯化工艺的优化,并利用微生物实验探究葫芦素对细菌生长的抑制情况。主要结果如下:采用超声波辅助提取工艺在葫芦素的制备中分别考察超声波功率、提取时间、提取温度以及料液比四个因素对葫芦素提取量的影响。通过设计四因素三水平的正交实验表,得出最佳提取工艺为料液比1:11(g/mL)、提取时间20min、提取温度80℃、超声波功率50%(300W)。此工艺下葫芦素的提取量为10.568μg/mL。在葫芦素纯化工艺优化中,首先对S-8、AB-8、D-101、X-5、HPD-100、XAD-7六种型号大孔吸附树脂进行筛选,确定选用吸附-解吸效果均表现良好的D-101型树脂进行后续葫芦素纯化工艺的优化。在静态纯化工艺优化中,首先绘制吸附-解吸动力学曲线,确定静态吸附饱和时间为4h,解吸平衡时间为2.5h;再考察不同的洗脱剂浓度以及温度对纯化效果的影响。确定最佳洗脱剂浓度为70%乙醇溶剂,静态吸附温度40℃,解吸温度50℃。在动态纯化工艺优化部分,绘制泄漏曲线以及洗脱曲线,确定浓度为13.17μg/mL的待纯化葫芦素溶液最佳进样量为270mL,洗脱剂用量170mL为宜;考察不同的流动速度对树脂吸附-解吸纯化效果的影响,确定最佳的粗提液上样速度以及洗脱剂解吸速度同为2BV/h。结合静态及动态吸附-解吸的最佳工艺对葫芦素粗提液进行纯化,将纯化物经高效液相色谱分析,葫芦素的含量可达95.56%,纯度较高。采用牛津杯法进行黄瓜嫩叶中葫芦素的抑菌性研究。结果表明葫芦素对大肠杆菌及金黄色葡萄球菌的抑制效果尤为明显,最低抑菌浓度分别为11.17μg/mL和22.33μg/mL,对沙门氏菌生长的抑制稍弱于前两者,最低抑菌浓度为44.65μg/mL。自此葫芦素可由黄瓜嫩叶中制得,作为一种新型天然抑菌剂进行开发利用,也为探索其在抗癌、提高人体免疫力等领域的作用奠定理论基础。
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