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前言金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)广泛分布于自然界及人类和动物的皮肤、与外界相通的腔道粘膜表面,可产生多种毒素和毒素酶,是引起人类机会性、医院内感染的主要病原菌之一。自20世纪60年代在欧美首先发现耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococccus aureus, MRSA)以来,MRSA在临床分离的葡萄球菌中比例不断增加,已成为医院内感染的重要病原菌；研究表明,我国MRSA感染已占到医院内感染的25%以上,MRSA感染占金黄色葡萄球菌感染的74%以上。目前,MRSA感染已不仅是医院内获得性疾病,社区获得性MRSA (CA-MRSA)感染也同样常见,并常有暴发流行的报道；1998～1999年,我国9大城市CA-MRSA感染患者占金黄色葡萄球菌感染的21.84%；2002～2003年,CA-MRSA分离率为37%,并呈上升趋势。研究者认为,CA-MRSA感染会对人类健康产生威胁。因此,对健康人群金黄色葡萄球菌定植状况、感染、耐药性进行调查及研究,了解MRSA在健康大学生鼻腔中定植状况及耐药性,为防止更多耐药株形成,指导合理使用抗生素具有重要的意义。方法1、鼻拭子样本增菌培养实验对象为中国医科大学五年制本科生；实验对象分为两组,A组320名学生样本由学生在病原生物学实验课中自行采集；B组210名学生样本由研究者采集；从学生鼻腔深处取菌,接种于LB培养基(液态)培养,增加细菌菌量。2、革兰氏染色增菌后样本进行革兰氏染色：涂片—干燥—固定—染色—镜检；A组样本的实验操作分别由学生和研究者进行,B组样本的实验操作均由研究者进行。3、高盐甘露醇培养基分离培养用已烧灼灭菌冷却的接种环取革兰氏染色呈阳性、球形的LB培养基培养菌液,按分段划线法接种于高盐甘露醇琼脂培养基上,放37℃电热恒温箱培养36h。4、血浆凝固酶试验取干净载玻片,用记号笔在背面划三圆圈,按序号标记(1～3)；取50μl生理盐水滴到第2、3个标记圈内,取50μl兔血浆滴到第1、3个标记圈内,取50μl革兰氏染色呈阳性、球形的LB培养菌液滴到第1、2个标记圈内,并充分混匀,15s内观察结果。5、药物敏感性试验按无菌操作法用接种环从双阳性金黄色葡萄球菌(高盐甘露醇培养基培养阳性、血浆凝固酶试验阳性)LB培养基中取菌液,用灭菌玻璃棒反复均匀涂于普通琼脂平板培养基上(注意不要划破培养基),以便生长出均匀的菌苔。用沾酒精点燃灭菌的小镊子取药物纸片(青霉素G、氨苄西林、红霉素、链霉素、庆大霉素)贴于普通平板培养基上,并轻轻按压贴紧,放37℃电热恒温箱培养17h。6、PCR扩增法进行mecA基因检测取5μl经碎菌处理的双阳性金黄色葡萄球菌(高盐甘露醇培养基培养阳性、血浆凝固酶试验阳性)LB培养菌液为模板,于94℃变性5min,进行PCR循环；循环条件为：于94℃30s.50℃30s.72℃1min,共40个循环；最后于72℃再延伸5min；取扩增产物5μl,进行10g/L琼脂糖凝胶(含EB替代)电泳(100V,30min),于计算机照相处理系统观察、照相。7、统计学处理应用SPSS13.5软件对所得数据进行统计学分析。结果1、A组320例健康大学生鼻腔样本中56例革兰氏染色呈阳性、球形细菌,其中26例高盐甘露醇培养基培养呈阳性,27例血浆凝固酶试验呈阳性,24例金黄色葡萄球菌呈双阳性(高盐甘露醇培养基培养阳性、血浆凝固酶试验阳性)；24例双阳性金黄色葡萄球菌中5例对青霉素G耐药、4例对氨苄西林耐药、3例对红霉素耐药,4例存在耐药基因(mecA基因)。2、B组210例健康大学生鼻腔样本中123例革兰氏染色呈阳性、球形细菌,其中27例高盐甘露醇培养基培养呈阳性,24例血浆凝固酶试验呈阳性,22例金黄色葡萄球菌呈双阳性(高盐甘露醇培养基培养阳性、血浆凝固酶试验阳性)；22例双阳性金黄色葡萄球菌中12例对青霉素G耐药、10例对氨苄西林耐药、3例对红霉素耐药,11例存在耐药基因(mecA基因)。结论1、A组320例健康大学生自行采集样本中24例(7.5%)存在金黄色葡萄球菌定植,4例(1.3%)mecA基因阳性；4例mecA基因阳性样本中对青霉素G(100%)、氨苄西林(100%)、红霉素(75%)耐药,对链霉素(100%)、庆大霉素(100%)敏感。2、B组由研究者采集210例健康大学生样本中22例(10.5%)存在金黄色葡萄球菌定植,11例(5.2%)mecA基因阳性；11例mecA基因阳性样本中对青霉素G(100%)、氨苄西林(90.9%)、红霉素(27.3%)耐药,对链霉素(100%)、庆大霉素(100%)敏感。