嗜热细菌β-糖苷酶的突变酶TnglyE338A在寡糖合成中的应用

来源 :长春理工大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lqh2012
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传统的化学法和酶法在大规模合成寡糖方面都有一定局限性。近年来,分子生物学技术大大推动了糖苷酶合成寡糖的研究,将糖苷酶催化中心亲核体氨基酸定点突变为非亲核体氨基酸,导致酶的原有水解活性丧失,只催化糖苷键合成反应,寡糖产量大幅度提高,人工产生了一类新酶—糖苷合成酶。本文以非解朊栖热菌HG-102的耐热β-糖苷酶为对象,通过基因定点突变将β-糖苷酶的催化中心亲核体氨基酸置换为非亲核体氨基酸获得耐热β-糖苷合成酶TnglyE338A,并通过有机合成制备β-糖苷合成酶TnglyE338A酶促反应的各种底物一糖基供体和糖基受体,尝试不同的糖基供体和糖基受体,制备出了寡糖和多糖。并通过正交实验对反应条件进行了的优化(缓冲液pH为8.8、酶的用量为90μg、反应温度为55℃)使β-糖苷合成酶TnglyE338A的转糖基效率达到25.9%。目前国际上还没有关于耐热糖苷合成酶合成寡糖和多糖的报道,这为今后开发寡糖及多糖的工业化生产提供了可能。
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