论文部分内容阅读
目的1、研究高锌/低锌预处理后，损伤大鼠脊髓中的锌（Zn）及其锌转运受体-1（ZnT1）与BDNF/TrkB的分布变化密切相关，提示锌代谢与BDNF/TrkB信号通路相关。2、研究高锌/低锌预处理后，伴随损伤脊髓中的Zn、ZnT1与BDNF、TrkB的分布变化，脊髓继发性损伤程度及恢复情况发生相应的改变，高锌促进ZnT1表达，同时促进BDNF、TrkB上调，提示ZnT1可能参与调控BDNF/TrkB信号通路，促进脊髓损伤后的修复。实验方法1、低锌/高锌预处理大鼠，观察脊髓Zn/ZnT1与BDNF/TrkB表达。利用金属自显影技术（Autometallography, AMG）检测锌在各组动物脊髓背角的分布变化；利用免疫组织化学技术检测锌预处理对动物脊髓ZnT1、BDNF、TrkB表达的影响。2、低锌/高锌预处理大鼠后，建立脊髓（T10）左侧半切模型（spinal cord injury，SCI）,观察锌预处理对脊髓损伤动物的ZnT1、BDNF、TrkB表达的影响。采用联合行为评分（combined behavioral score，CBS）及诱发电位检测脊髓损伤后功能恢复； HE染色观察脊髓的形态学变化； AMG技术检测锌在各组动物脊髓背角的分布变化；利用免疫组织化学技术、Western Blot技术检测锌预处理对SCI模型动物脊髓内ZnT1与BDNF/TrkB表达的影响。实验结果1、锌离子在大鼠脊髓背角的分布。AMG阳性反应产物为棕黑色颗粒，主要分布在大鼠脊髓背角神经元轴突末端，并呈颗粒状分布。2、ZnT1、BDNF、TrkB在大鼠脊髓背角神经元的分布。免疫组织化学结果显示，免疫阳性反应产物呈棕黄色， ZnT1主要分布在脊髓灰质的神经元的细胞膜上，BDNF主要分布在脊髓灰质的神经元的细胞质内，TrkB主要分布在神经元细胞核内。3、低锌或高锌预处理对SCI模型动物脊髓背侧角锌离子的影响。AMG检测结果显示:与假手术组(sham-operated group, Sham)相比,正常动物模型组(zinc-adequate dietary, ZA)与低锌预处理组(marginal zinc-deficientdietary, MZD)的术侧脊髓背侧角浅层中的锌离子均显著减少(P<0.05)，其中MZD组比ZA组减少更为显著(P<0.05)；而高锌预处理组(zinc-high dietary, ZH)术侧脊髓背侧角浅层的锌离子均显著增多(P<0.05)。4、低锌或高锌预处理对SCI模型脊髓背侧角神经元BDNF、TrkB、ZnT1的影响。免疫组织化学检测结果表明: BDNF、TrkB和ZnT1阳性产物为棕黄色颗粒状，BDNF主要分布在脊髓背侧角神经元的细胞质，TrkB主要分布在细胞核内，ZnT1主要分布在细胞膜上。与Sham组相比，ZA、MZD和ZH组术侧脊髓背侧角BDNF、TrkBZnT1阳性表达均增高(P<0.01)。ZH组的表达高于ZA组(P<0.05)；MZD组的表达低于ZA组(p<0.05)。Western Blot检测结果表明:与Sham组相比，ZA、MZD和ZH组术侧脊髓背侧角BDNF、TrkB和ZnT1的阳性表达均显著增高(P<0.05)。与ZA组相比，ZH组的阳性表达增多(P<0.05)；MZD组的阳性表达减少(P <0.05)。结论1、正常大鼠脊髓背角富含游离锌离子和锌转运受体-1。2、低锌预处理能使SCI模型脊髓背侧角浅层锌离子明显减少，SCI后行为学评分改变不明显，而高锌预处理能使SCI模型脊髓背侧角锌离子显著增多，同时促进ZnT1、BDNF及其受体TrkB表达，ZnT1的高表达促进BDNF、TrkB上调，进而促进动物行为学改善，有利于脊髓功能恢复。