真菌毒素是真菌的次生代谢产物。1965年首次从赭曲霉培养物中分离出来其次级代谢产物—赭曲霉毒素A（OTA）。赭黄霉毒素A是最重要的真菌毒素之一,并且对人类和动物都能产生毒性作用。由于其肾毒性、基因毒性、神经毒性、免疫毒性、胚胎毒性、致畸性以及致癌性等毒性作用,对其研究具有巨大的的公共卫生及经济意义。人们发现主要由曲霉菌和青霉菌产生的OTA在大麦、小麦、高粱、燕麦和玉米等农产品存在,因此,对快速高灵敏度的OTA检测方法的研究就显得尤为重要。本研究的目的是制备出针对OTA的单克隆抗体,并将其应用于建立灵敏的、特异的、快速的和可重复的间接竞争ELISA分析（ic.ELISA）方法、胶体金免疫层析试纸条检测方法和金纳米花免疫层析试纸条检测方法。此研究中,用OTA-BSA交联物作为免疫原免疫四只雌性Balb/c小鼠,首次免疫时,将弗式完全佐剂与OTA-BSA免疫原乳化进行小鼠皮下注射,之后用弗式不完全佐剂与免疫原乳化后进行免疫。利用OTA-KLH作为检测包被原,检测小鼠血清效价。收集效价最高的小鼠的脾脏细胞并与SP2/0骨髓瘤细胞通过聚乙二醇（PEG）介导的细胞融合来生产杂交瘤细胞。利用ic-ELISA方法经亚克隆筛选获得3株阳性细胞（6E5,10D3和8F5）。随后将单克隆细胞株扩大培养后注射入成熟小鼠腹腔以制备大量的含有单克隆抗体的腹水,并采用两步沉淀法（辛酸和饱和硫酸铵）进行腹水纯化。经亚类试剂盒测试得知,6E5,10D3和8F5分泌的抗体都属于Ig G1亚类,BCA试剂盒测定纯化抗体浓度,分别为1.5、1.43和2.25 mg/m L。由于6E5细胞株在培养过程中生长良好且可产生大量抗体,此单克隆抗体对其抗原（OTA-KLH）反应灵敏并对冻融稳定,因此选择其进行进一步研究。6E5产生的单克隆抗体的亲和常数（Kaff）为3.7 x10~8L/mol。采用竞争抑制ELISA对与结构相关、具有共同抗原表位的其他真菌毒素（抗原）进行检测,测定此抗体的交叉反应性。结果显示,该抗OTA单克隆抗体能够与赭曲霉毒素B（OTB）结合,具有交叉反应活性,而未观察到与Zearalenone（ZEN）、Citrinin（CTN）、Deoxynivalenol（DON）和Fumonsins B1（FB1）等其他真菌毒素之间的交叉反应。为了研究OTA与OTB的竞争效果,进一步优化了间接竞争ELISA条件。得到OTA与OTB的竞争性结合曲线,结果表明该抗OTA单克隆抗体能够特异性检测OTA,对OTB的交叉反应性较低（13.4%）。用6E5抗OTA单克隆抗体建立ic-ELISA、CGNs和AuNFs的检测方法对实际样品中OTA毒素进行检测。为保证检测结果的稳定,调整各项参数至最佳。优化后的ic-ELISA用来检测OTA毒素,线性范围为0.06-0.6 ng/m L,半数抑制率（IC50）达到0.2 ng/m L,检测限（LOD）为0.03ng/m L。加标样品平均回收率为（89.315±2.257）%,平均变异系数（CV）2.182%,低于5%的差异,这意味着系统误差很低。同时利用OTA单克隆抗体（OTA mAb）建立了一种灵敏快速的胶体金纳米粒子（CGNs）试纸条检测方法。用除OTA以外的几种真菌毒素来测定试纸条的交叉反应性。测试线上出现一条红线,说明没有交叉反应性（即高特异性）。灵敏度试验采用不同浓度（0-10 g/m L）的OTA标准溶液进行测定。测定OTA的LOD为5g/m L。同时使用实际食物样品（玉米）检测,并以此评价此检测方法是否有效,在5分钟之内可以迅速得出检测结果,结果表明,这些样品没有OTA污染。因此,基于CGNs的检测方法是有效的并可以成功应用于实际样检测。金纳米花免疫层析制备的研究表明溶液制备成功且AuNFs与anti-OTA mAb成功结合。采用OTB、CTN、FB1、DON、ZEN等不同毒素对条带测定的特异性进行分析。结果表明,除对OTB毒素的交叉反应性较低外,其余均无交叉反应性（高特异性）。用不同浓度的OTA标准溶液检测AuNFs试纸条的灵敏度。颜色在1μg/m L时消失,表明此试纸条的检测限为1μg/m L。真实样品--玉米和咖啡样品的测试过程中,反应均在5分钟内完成,试样条上出现两条红色条带,结果表明,样品无OTA污染。因此,AuNF作为探针可以成功应用于OTA检测。分别用ic-ELISA、CGNs和AuNFs三种检测方法检测玉米和咖啡样品中OTA,检测结果一致。因此,使用6E5所分泌的抗OTA单克隆抗体建立的这三种试验方法均可以有效应用于玉米和咖啡样品中OTA的检测。