柑橘是全世界最重要的水果之一,果实营养丰富,口感好。柑橘类果实在采后贮藏期间容易发生一种严重的生理病害-果实汁胞的木质化。目前柑橘果实汁胞的木质化形成的分子机制仍不清楚,MYB家族转录因子参与植物木质素的代谢过程在模式植物和树木上已有很多研究,但他们在柑橘果实木质化中的功能及调控机制尚不清楚。我们根据前期的miRNA及转录组测序,并结合实时荧光定量PCR分析发现,随着果实汁胞木质化的加重,CsMYB330、CsMYB308和CsMYB85转录因子的表达水平发生显著变化,且汁胞木质素含量显著升高。研究结果表明CsMYB330和CsMYB308可以识别并结合Cs4CL1基因启动子中的AC元件并精细调控Cs4CL1基因的表达;在精细调控过程中,CsMYB330被鉴定为转录激活因子,而CsMYB308是转录抑制因子。此外,通过在果实汁胞中瞬时过表达这两个转录因子,发现Cs4CL1基因的表达发生显著的变化。另外,我们还分离并鉴定了CsMYB85转录因子,在果实汁胞木质化过程中,该基因的表达水平也发生显著的变化。结果表明,CsMYB85转录因子可以结合CsMYB330的启动子,调控其表达;在酵母和烟草叶片中与CsMYB308相互作用。瞬时转化表明,在过表达CsMYB85的果实汁胞中Cs4CL1基因的表达水平和木质素含量显著增加;在过表达CsMYB85的转基因拟南芥植物中,木质素含量和At4CL1基因的表达水平也显著增加。综上所述,转录因子CsMYB330、CsMYB308和CsMYB85在柑橘果实汁胞木质化中起重要作用,其中CsMYB330和CsMYB308是直接调控汁胞木质化,而CsMYB85是间接调控,本研究可为柑橘采后木质化的防控和柑橘育种提供理论依据。