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猪2型圆环病毒(porcine circovirus 2,PCV2)与近年来世界各国普遍发生的断奶仔猪多系统衰竭综合征(Postweaning multisystemic wasting syndrome,PMWS)密切相关,该病主要以进行性消瘦和多系统病理损伤为特征,更为严重的是PCV2的感染可以造成免疫抑制,引起其他各种病原的继发感染,给全球养猪业造成相当严重的经济损失。本研究建立了基于TaqMan探针的PCV2荧光定量PCR检测方法,并应用此方法对广东省某大型猪场不同类型猪群血液中PCV2进行定量检测,旨在为PCV2的流行病学、致病机理等相关领域的研究提供依据。主要内容及结果如下:1.PCV2 ORF2基因的克隆根据GenBank中猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2基因序列设计一对引物,为便于克隆到表达载体上,在引物P1中引入Kpn I酶切位点,引物P2中引入HindⅢ酶切位点。用PCR从PCV2细胞培养物中扩增出ORF2基因(702bp)。将此基因片段克隆入pMD 18-T载体,经PCR、酶切、测序鉴定,筛选出重组质粒pMD-ORF2。2.PCV2荧光定量PCR检测方法的建立根据PCV2 ORF2基因序列中的保守片段设计一对特异引物和TaqMam探针。以质粒pMD-ORF2为模板,通过条件优化,以定量的10倍系列稀释的质粒pMD-ORF2为标准品进行荧光定量PCR扩增并制作标准曲线建立了PCV2的荧光定量PCR检测方法。结果表明该方法检测灵敏度可达1.0×100拷贝/μL,线性范围为109～100,达10个数量级;对起始浓度为1.0×106、1.0×105、1.0×104拷贝/μL的标准品的最终实际测得值分别为1.001×106、0.935×105和0.987×104拷贝/μL,变异系数分别为2.527%、2.067%和2.092%,说明此方法具有良好的准确性和重现性。对阳性组织病料的检测表明该方法的检测灵敏度高出常规PCR,与nPCR具有相同的灵敏度。3.应用FQ-PCR对不同类型猪群中PCV2的定量检测应用FQ-PCR对广东省某规模化养猪场PCV2感染的调查情况表明,所有被检测的猪群均存在PCV2感染,不同类型猪群的感染率为100%,全场猪的平均感染率为76.9%(260/338)。其中,生长肥育猪群PCV2感染率最高为90%,而种公猪群感染率最低为30%。在病毒荷载量方面,整个猪群的血液中病毒荷载量并不高,处于103～104 copy/μL之间。