【摘 要】
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葡萄霜霉病是一种气传的多循环卵菌病害,严重影响葡萄的产量和品质。目前生产上主要以化学药剂进行防治,为了减少喷施化学药剂带来的诸多负面影响,本文以从葡萄叶片表面分离得到的生防菌株为研究对象,应用混合培养法、离体叶片点接法以及田间防治试验,测定了 H1和H2菌株的分生孢子悬浮液及发酵液对葡萄霜霉病菌孢子囊和游动孢子萌发的抑制作用及对葡萄霜霉病的防治作用,并结合液质联用技术对菌株H1代谢产物进行了检测,
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葡萄霜霉病是一种气传的多循环卵菌病害,严重影响葡萄的产量和品质。目前生产上主要以化学药剂进行防治,为了减少喷施化学药剂带来的诸多负面影响,本文以从葡萄叶片表面分离得到的生防菌株为研究对象,应用混合培养法、离体叶片点接法以及田间防治试验,测定了 H1和H2菌株的分生孢子悬浮液及发酵液对葡萄霜霉病菌孢子囊和游动孢子萌发的抑制作用及对葡萄霜霉病的防治作用,并结合液质联用技术对菌株H1代谢产物进行了检测,测定了有效活性成分;应用平板对峙法得到无拮抗作用的生防菌组合,进一步筛选获得了更有效的生防菌组合,为葡萄霜霉病的生物防治提供了新的思路和方法,为减少化学药剂施用提供了有效的途径。主要结果如下:（1）菌株H1和H2的分生孢子悬浮液对葡萄霜霉病菌孢子囊及游动孢子的萌发均有较强的抑制作用。其中,H1分生孢子悬浮液对葡萄霜霉病菌孢子囊及游动孢子的萌发抑制率分别为52.5%和76.8%,菌株H2分生孢子悬浮液的抑制率分别为44.6%和60.0%。经摇床培养,两株菌株的发酵液均可抑制孢子囊及游动孢子的萌发,H2发酵液对孢子囊萌发的抑制率为87.3%,显著高于H1发酵液（68.0%）;H1发酵液对游动孢子萌发的抑制作用显著高于H2发酵液,抑制率分别为73.2%和49.2%;室内防治结果表明,菌株H1分生孢子悬浮液防治效果显著高于菌株H2的分生孢子悬浮液,防治效果分别为75.6%和44.3%,而两个菌株发酵液的防治效果均高达100%;田间防治结果表明,菌株H1的分生孢子悬浮液和发酵液的防治效果分别为33.8%和34.6%,低于与化学药剂嘧菌酯的防治效果（41.3%）。通过形态观察和分子鉴定,菌株H1为黑曲霉（Aspergillus niger）。（2）应用液质联用技术对黑曲霉H1发酵液中的成分进行测定,其中负离子模式下得到230种差异代谢物,正离子模式下得到365种差异代谢物。对596种差异代谢物进行Human Metabolome Database（HMDB）分类注释,其中279种差异代谢物被注释,主要物质为有机酸及其衍生物。应用混合培养法证明其代谢产物葡萄糖酸、2-糠酸、2,5-呋喃二甲酸、5-羟基-2-呋喃甲酸对葡萄霜霉病菌孢子囊有抑制作用,其中2-糠酸抑制率最高为49.8%。（3）应用平板对峙法对菌株H1和其它6株对葡萄霜霉病有防治作用的生防菌株进行拮抗试验,筛选得到20组生防菌组合。采用孢子囊萌发抑制法初筛和离体叶片点样法复筛的二级结合筛选模式,对上述组合进行测定。复筛后得到3组对葡萄霜霉病有较高防效的生防菌组合,分别是P5+K2、P5+P1+K2、P5+P1+LB4,防治效果为1 00%,97.0%和95.4%。田间防治试验表明,在发病后期,3个组合的防治效果分别为52.3%,45.8%和34.3%,其中组合P5+K2的防治效果最好,显著高于另两个组合,且组合的防效显著高于单株,但生防菌株P5的相容性最高,与其它菌株相比有更好的协同增效作用。
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