苹果皮渣多酚提取、纯化及抗氧化活性研究

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苹果多酚是一类具有生物活性的天然产物,主要集中在果皮和果籽中,具有较好的抗氧化功能。中国作为苹果生产和加工大国,苹果多酚等功能成分会在榨汁过程中随果皮进入果渣中。目前除30%左右的苹果皮渣用于肥料、饲料外,每年有10-15万吨被直接废弃掉,不仅造成资源的严重浪费,同时也对环境造成污染。通过苹果皮渣多酚提取、纯化及抗氧化活性研究,不但可提高苹果深加工产品的附加值,延长苹果加工产业链;而且还可变废为宝,实现苹果功能成分的梯次利用。因此,开展苹果皮渣中多酚物质高值化利用研究具有重要的经济价值和社会意义。本文以工厂榨汁后的苹果皮渣为原料,采用有机溶剂协同超声波对多酚类物质处理提取,探索其最佳工艺条件;并用NKA-9大孔树脂法纯化苹果皮渣多酚,利用红外和高效液相(HPLC)鉴定苹果皮渣中多酚物质成分;采用ABTS法、DPPH法和FRAP等方法评价其清除自由基能力以及对Fe3+的还原能力,反应其体外抗氧化活性;建立了秀丽线虫模型,探讨苹果皮渣多酚对秀丽线虫在环境应激条件下,其存活时间的规律以及体内活性氧的变化规律,揭示其体内抗氧化的反应机制。论文的主要内容和研究成果如下:1.应用超声波辅助乙醇提取苹果皮渣多酚,在单因素试验的基础上,选取提取时间、超声功率、提取温度、料液比为自变量,多酚的提取率为响应值,根据响应面Box-Benhnken试验设计原理,采用4因子3水平的分析法模拟得到二次多项式回归方程的预测模型,优化出苹果皮渣多酚超声提取的工艺参数:超声时间10min,提取温度65℃,超声功率503W,料液比1:30,在此条件下每克干果渣多酚的提取率达4.53mg。2.选取NKA-9大孔树脂法纯化苹果皮渣多酚类物质,得到纯度为72%苹果皮渣多酚粉末。对纯化后的多酚进行红外光谱图和HPLC分析检测。结果表明:纯化后的苹果皮渣多酚中槲皮素及其糖苷类含量最高,约占总酚酸物质的59.54%;其次是根皮苷类约占22.75%,其它多酚类物质如原花青素B2、表儿茶素、绿原酸、咖啡酸等含量较低,约占18%。3.苹果皮渣多酚体外抗氧化试验研究表明:苹果皮渣多酚对ABTS自由基、DPPH自由基、超氧阴离子自由基均有较强的清除作用。对Fe3+具有显著的还原能力,在相同的浓度下,苹果皮渣多酚对自由基的清除率以及还原铁离子的能力均优于VC;抗氧化剂与自由基分析仪测试表明,每克苹果皮渣多酚清除自由基的能力相当于3.28g VC。4.苹果皮渣多酚体内抗氧化是以秀丽线虫为生物模型,探究苹果皮渣多酚对其衰老的影响,测定其正常培养条件下的平均寿命、生殖能力、压力应激条件下的存活率及体内活性氧的变化规律。结果表明,苹果皮渣多酚显著延长了秀丽线虫的寿命,其中100μg/mL的苹果皮渣多酚效果最显著,延长秀丽线虫平均寿命43.30%,并且对其产卵量没有显著影响。同样,100μg/mL的苹果皮渣多酚显著延长了热应激、紫外应激、氧化应激等环境条件下秀丽线虫的寿命和体内活性氧水平。总之,本研究从苹果皮渣中提取纯化出多酚粉末,优化了超声波辅助提取苹果皮渣多酚的最佳工艺条件;利用红外光谱法和反相高效液相色谱法对其多酚类物质进行了成分分析;采用不同的抗氧化体系评价了苹果皮渣总酚的体内和体外抗氧化活性;通过不同应激条件下秀丽线虫的存活规律揭示苹果皮渣多酚延长寿命和体内抗氧化作用机理。
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