PCV3对仔猪生长相关激素及功能基因表达的影响和PCV3相关的母猪繁殖障碍诊治

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目前已发现4种基因型的猪圆环病毒。1974年发现的PCV1无致病性;PCV2、PCV3均可引起严重的临床疾病,如仔猪断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)、猪皮炎和肾病综合征(PDNS)等,可引起仔猪生长缓慢和母猪繁殖障碍等症状;PCV4了解较少。目前关于PCV3如何引起仔猪生长缓慢,以及与PCV3相关的母猪繁殖障碍临床表现和病理变化的研究甚少。本文针对PCV3的研究内容主要分为两部分,具体如下:1.PCV3对仔猪生长相关激素及功能基因表达的影响为研究PCV3对仔猪的生长相关激素及功能基因表达的影响,探索PCV3导致仔猪消瘦的机制。本研究以8头23日龄的健康断奶仔猪为研究对象,随机均分成PCV3感染组、DMEM组,分别从颈部肌肉注射3 mL PCV3(10~9copies/mL)和DMEM。于注射前(0 d)及注射后3、7、14、21 d称量仔猪体重,观察其临床表现,采集各组仔猪口腔、鼻腔、肛拭子和血清,感染后21d剖检仔猪。采用qPCR检测口腔、鼻腔、肛拭子以及血清中PCV3病毒载量;ELISA法测定各组3、7、14、21 d仔猪血清的三碘甲状腺原氨酸(Triiodothyronine,T3)和甲状腺素(Thyroxine,T4)的浓度;RT-qPCR测定背最长肌、腿肌、脾脏、肝脏组织中生长相关功能基因GHR、IGF-1、IGF-1R的mRNA相对表达量;对动物实验仔猪日增重和血清中病毒载量与血清中T3、T4浓度和各组织中生长相关功能基因表达量进行Pearson相关性分析。检测临床猪只PCV3核酸阳性和抗体阳性的血清中T3、T4的浓度,并对临床血清中的PCV3载量、抗体水平与其T3、T4浓度进行Pearson相关性分析。结果发现,PCV3感染组仔猪平均日增重、末重均极显著低于DMEM组仔猪平均日增重和末重(P<0.01);PCV3感染组口腔拭子、鼻腔拭子、肛拭子、血清中的病毒载量在14 d达到最高;PCV3感染组T3浓度在感染的第14和21天均极显著高于DMEM组(P<0.01),T4的浓度无差异(P>0.05);与DMEM组相比,在背最长肌中,IGF-1基因的表达量表现为极显著的降低(P<0.01),在腿肌和脾脏中,GHR、IGF-1、IGF-1R基因的表达量均没有发现显著的差异(P>0.05),在肝脏中,发现GHR基因的表达量极显著增加(P<0.01),IGF-1R基因的表达量显著增加(P<0.05)。仔猪日增重、病毒载量与T3、T4浓度和生长相关功能基因表达量的Pearson相关性分析表明,仔猪日增重与T3浓度呈现为极显著的负相关(P<0.01),病毒载量与T3浓度呈现为极显著的正相关(P<0.01),日增重和病毒载量与T4浓度无统计学差异(P>0.05)。在背最长肌中,GHR、IGF-1R基因与仔猪日增重和病毒载量之间的相关性均无统计学差异(P>0.05);IGF-1基因与日增重呈现极显著的正相关(P<0.01),与病毒载量呈现极显著的负相关(P<0.01)。在腿肌和脾脏中,GHR、IGF-1、IGF-1R基因与仔猪日增重和病毒载量之间均无统计学差异(P>0.05)。在肝脏中,GHR、IGF-1R基因与仔猪日增重均呈现为极显著的负相关(P<0.01);GHR、IGF-1R基因与病毒载量呈现为极显著的正相关(P<0.01);IGF-1基因与仔猪日增重和病毒载量之间无统计学差异(P>0.05)。调查临床血清中T3、T4的浓度,结果显示,仅PCV3抗体呈阳性时,血清中T3的浓度表现为极显著的降低(P<0.01),当PCV3的核酸和抗体水平都为阳性时,T3浓度表现为极显著的升高(P<0.01);T4浓度差异不显著(P>0.05)。对临床血清的PCV3载量、抗体水平与其T3、T4浓度之间的Pearson相关性分析表明,T3的浓度与病毒载量之间呈现为极显著的正相关(P<0.01),与抗体水平之间无统计学差异(P>0.05);T4的浓度与病毒载量和抗体水平之间均无统计学差异(P>0.05)。综上所述,仔猪在感染PCV3期间,会引起甲状腺机能的紊乱,引起机体的甲状腺机能亢进或者是减退,造成机体对碳水化合物、脂质和蛋白质等的分解代谢紊乱,降低IGF-1基因对背最长肌的促生长和促细胞分裂作用,导致仔猪生长迟缓、日增重降低从而表现为消瘦。2.与PCV3相关的母猪繁殖障碍诊治2020年8月至12月期间,湖北地区某存栏220头约克夏母猪的规模化猪场,配种后的母猪存在有规律的返情现象。人工授精170头母猪,受胎率在10%左右。记录配种成功后母猪的产仔情况,43头怀孕母猪平均每头产仔6-7头,且有70%的仔猪在7日龄出现颤抖的临床症状。本研究通过采集母猪饲料槽中正在食用的饲料检测黄曲霉素B1含量;采集返情母猪的口腔、肛拭子以及血清;并随机剖检13头返情母猪,采集脾脏、淋巴结、脊髓、子宫、卵巢等组织,检测繁殖障碍性病毒的感染情况;观察母猪卵巢病理变化情况,汇总分析结果,诊断该场母猪受胎率低、持续返情的原因。GB13078-2017规定饲料中黄曲霉素B1允许量为<20μg/kg,从该猪场带回的饲料中黄曲霉素B1含量均在允许范围内。使用PCR、RT-PCR方法检测PCV2、PCV3、PRV、PPV、PRRSV、CSFV等繁殖障碍性病原体,口腔、肛拭子和血清的检测结果均为阴性;13头母猪的PCV2阳性率为69.23%(9/13),PCV3阳性率为38.46%(5/13),PCV2和PCV3混合感染阳性率为30.76%(4/13)。使用qPCR方法检测各组织中PCV2、PCV3病毒载量,发现PCV2在脊髓中的病毒载量最高,脾脏次之,卵巢中最少;PCV3在脾脏中病毒载量最高,淋巴结次之,子宫中病毒载量最少。对检测到的PCV2和PCV3部分阳性样品进行ORF2基因序列分析,发现PCV2为2d亚型,PCV3为3a亚型。观察卵巢病理切片发现,卵泡细胞数量减少,卵泡腔形状不规则、塌陷扁平。经过诊断,确定该场母猪持续返情、屡配不孕为PCV2和PCV3混合感染,进而引起繁殖障碍。根据诊断结果和该场情况,采取全群接种PCV2疫苗,配合全场消毒,加强生物安全防控,成功解决该场母猪繁殖障碍问题,恢复正常生产。
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