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药用植物内生菌是定殖于植物组织内的一种特境微生物,其次级代谢产物种类繁多,生物活性多样,是筛选新型农用活性物质的重要资源。本文以黄山市祁门县的特色中药材祁白术为材料,通过组织块分离培养法分离纯化获得祁白术地下根茎内生菌23株,根据形态与培养特征、生理生化特性、16S rRNA序列分析等方面对纯化后的菌株进行菌种鉴定,并评价其对大豆疫霉病原菌等6种植物病原菌的抑菌活性,旨在为祁白术内生菌在农业病害防治方面的应用提供理论依据。主要研究内容与结果如下:1.祁白术内生菌的分离、纯化采用表面消毒和组织块分离培养法,本文从祁白术健康野生地下根茎内分离纯化到内生细菌15株,内生真菌8株。以辣椒疫霉病原菌(Phytophthoracapsici)大豆疫霉病原菌(Phytophthora sojae)、枣炭疽病原菌(Colletotrichum coccodes)、水稻弯孢病原菌(Curvularia lunata)、玉米茎基腐病原菌(Fusarium oxysporum)和小麦赤霉病原菌(Fusariumgraminearum)为供试菌,采用平板对峙试验测试内生菌对这些植物病原菌的抑制作用。试验结果表明,23株内生菌对上述某些供试病原菌有抑制活性,其中内生菌QBZ-1对大豆疫霉病原菌和玉米茎基腐病原菌具有显著的抑菌活性。2.祁白术内生菌QBZ-1的鉴定利用显微镜对内生菌QBZ-1进行观察,发现其菌体以长杆状为主,少数呈短杆状,进一步的革兰氏染色证实该菌为革兰氏阳性菌。采用细菌生理生化试验检测其部分生理指标,发现菌株QBZ-1可产生过氧化氢酶水解过氧化氢,是一种耐氧菌,且其在代谢的过程中会产酸。结合16S rRNA序列比对分析,鉴定该菌株为一种蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)。3.平板对峙法评价内生菌QBZ-1对6种植物病原菌的抑菌活性采用平板对峙法评价内生菌QBZ-1对供试植物病原菌的抑菌活性结果表明,内生菌QBZ-1对水稻弯孢病原菌、枣炭疽病原菌、玉米茎基腐病原菌和大豆疫霉病原菌均具有抑制作用,抑制率分别为9.63%、8.43%、23.57%和31.90%。祁白术内生菌QBZ-1对大豆疫霉病原菌和玉米茎基腐病原菌均有显著的抑菌活性。4.滤纸片抑菌法评价内生菌QBZ-1在不同培养基中的发酵产物对6种植物病原菌的抑菌活性采用滤纸片抑菌法评价内生菌QBZ-1在5种不同培养基中的发酵产物对6种植物病原菌的抑菌活性结果表明,马丁培养基发酵产物可对其中5种病原真菌有抑制效果,且对大豆疫霉病原菌抑制作用最佳;马铃薯葡萄糖培养基、麦芽培养基和查氏培养发酵产物对其中4种病原菌有抑制效果,高氏一号培养基发酵产物对其中3种病原菌有抑制作用。从发酵产物的产量和对病原菌抑制效果的综合考虑,马丁培养基发酵产物更适合于后续的深入研究。综上所述,祁白术内生菌QBZ-1在马丁培养基中的发酵产物对5种病原真菌有抑制效果,后续值得对该代谢产物进行分离、纯化,深入研究其抑制这些植物病原菌的具体作用机制,为筛选新生物农药提供支持。