目的 蜘蛛香(Valeriana jatamansi Jones)为败酱科(Valerianaceae)缬草属(Valeriana)植物蜘蛛香的根及根茎。课题组前期研究表明:蜘蛛香二氯甲烷提取物DEVJ体外对多个人源性肿瘤细胞株均具有显著抑制作用。为了阐明蜘蛛香抗肿瘤作用的药效物质基础,本研究拟通过硅胶柱层析技术,结合体外抗肿瘤实验,从蜘蛛香中分离、纯化抗肿瘤有效部位,以期去粗存精,增效减毒,并利用TLC及UPLC-ESI-MS对纯化后的有效部位进行分析,以阐明蜘蛛香抗肿瘤有效部位化学成分的化学结构类别。分离得到蜘蛛香抗肿瘤有效部位后,拟利用中压柱层析、高效液相柱层析、PTLC等现代色谱技术较系统地研究有效部位的化学成分,并利用1H NMR谱、13C NMR谱、HR-ESI-MS、ESI-MS等现代波谱技术解析化合物的化学结构,对分离得到的化合物,拟评价其体外对人源性肿瘤细胞株的抑制作用。方法1、用95%乙醇对蜘蛛香药材进行渗漉提取,提取物用二氯甲烷萃取,得到二氯甲烷提取物即蜘蛛香粗提物DEVJ。2、利用硅胶柱层析技术,对蜘蛛香粗提物进行进一步的分离、纯化。3、利用TLC,UPLC-ESI-MS技术对纯化后的有效部位进行分析。4、利用MTT法评价有效部位的体外抗肿瘤作用。5、通过中压柱层析、制备薄层层析、制备型高效液相柱层析等现代色谱技术从有效部位中分离、纯化化合物。6、利用1H NMR、13C NMR、HR-ESI-MS等现代波谱技术解析化合物的化学结构。7、MTT法研究化合物体外对人源性肿瘤细胞株的抑制作用,及对人源瘤株抑制作用的量-效关系。结果1、利用硅胶柱层析技术将蜘蛛香粗提物(DEVJ)分成了 A、B、C三个部分,即:DEVJA、DEVJB、DEVJC。2、利用TLC法对DEVJB进行了分析,结果显示:DEVJB主要成分为单萜环烯醚酯类成分。3、利用UPLC-ESI-MS对DEVJB进行了分析。水-乙腈系统梯度洗脱,结果显示:DEVJB中有多个单萜环烯醚酯类成分。4、用MTT法对DEVJB进行了体外抗肿瘤作用研究。结果表明:DEVJB体外对人胃癌SGC-7901、MKN-45,人肺癌NCI-H1975,人胰腺癌BXPC-3,人结肠癌HT-29,五株人源肿瘤细胞株具有显著抑制作用,IC50分别为:5.94±0.13、1.39±0.07、2.61±0.10、1.71±0.06、4.43±0.12 μg/mL。5、从DEVJB中分离得到了 5个化合物,并鉴定了其化学结构。其中,4个为单萜环烯醚酯类化合物,1个为倍半萜内酯类化合物。4个单萜环烯醚酯类化合物分别为:Valtrate(1);Desoxidodidrovaltrate(2);7-acetoxyl-Nardostachin(3);11-ethoxyviburtinal(4);倍半萜类化合物为:8-acetoxyl-pathchouli alcohol(5)。5个化合物均为已知化合物,8-acetoxyl-pathchouli alcohol为首次从蜘蛛香中分离得到。6、4个单萜环稀醚萜酯类成分体外对MDA-MB-231人乳腺癌细胞均具有显著的抑制作用。IC50 分别为:19.02±0.25、23.49±0.36、21.03±0.18、49.71±0.41μmol/L。8-acetoxyl-pathchouli alcohol 体外对 MDA-MB-23 1几乎无抑制作用。结论对蜘蛛香进行了提取、粗分离,得到了蜘蛛香二氯甲烷提取物。利用硅胶柱层析,从蜘蛛香二氯甲烷提取物中分离、纯化得到了一个抗肿瘤有效部位DEVJB,DEVJB体外对五种人源肿瘤细胞株均具有显著抑制作用。DEVJB中主要化学成为单萜环烯醚酯类。从该有效部位中共分离得到了 4个单萜环烯醚酯类成分及1个倍半萜内酯类成分,并鉴定了其化学结构。4个单萜环烯醚酯类成分体外对MDA-MB-231人乳腺癌细胞具有抑制作用。综上所述:DEVJB的主要药效物质基础为单萜环烯醚酯类成分,该类成分体外均具有抗肿瘤作用。从单萜环烯醚酯类成分中发现抗肿瘤先导化合物,具有良好的应用前景。将DEVJB开发成中药抗肿瘤新药具有一定的应用价值。