隔药饼灸对FGIDs(肝郁脾虚证)大鼠海马和杏仁核AMPA受体的调节机制

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目的:观察隔药饼灸对功能性胃肠病(FGIDs)(肝郁脾虚证)大鼠胃肠吸收和感觉异常的影响,结肠神经递质5-羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)的影响及对海马、杏仁核神经元细胞内A-氨基羟甲基恶唑丙酸(AMPA)受体亚型的表达及激活,探讨隔药饼灸对FGIDs(肝郁脾虚证)大鼠治疗作用的可能机制,为隔药饼灸治疗FGIDs的临床应用提供部分实验依据。方法:1、以FGIDs(肝郁脾虚证)大鼠为研究对象,将48只SD大鼠按随机数字表随机分为空白组、模型组、隔药饼灸组和逍遥散组。对大鼠动物行为学、宏观表征进行观察,尿D-木糖排泄率和肠道敏感性进行检测,运用高效液相、Real time-PCR等技术手段检测结肠5-HT、DA及海马、杏仁核c-fos表达。2、将72只SD大鼠随机分为空白组、模型组、隔药饼灸组、隔药饼灸+6-氰基-7-硝基喹喔啉-2,3-二酮(CNQX)组、CNQX组和假手术组,运用Western-blot、Real time-PCR等多种技术手段,以隔药饼灸为干预手段,以杏仁核微量注射AMPA受体拮抗剂JCNQX为对照,观察中枢海马CA1区、CA3区、DG区和杏仁核BLA区AMPA受体亚基GluR1、GluR2表达变化。结果:1.造模后大鼠由初次束缚时反抗不安,逐渐表现为静卧少动,神态倦怠,毛发枯黄光泽,大便多稀溏等;体重、食量增加缓慢,大鼠穿格数、起立数和修饰数明显下降;尿D-木糖排泄率持续降低,肠道敏感性增加。与模型组相比,隔药饼灸组和逍遥散组尿D木糖排泄率升高,肠道敏感性降低,差异有统计学意义(P<0.01)。2.与空白组相比,模型组大鼠结肠5-HT、DA表达增加,差异均有统计学意义(P<0.01或P<0.05);与模型组相比,逍遥散组和隔药饼灸组5-HT、DA表达下降,有明显差异(P<0.05,P<0.01);与逍遥散组相比,隔药饼灸组5-HT、 DA差异均有统计学意义(P<0.05)。与空白组相比,模型组海马、杏仁核区c-fos表达均有统计学意义(均P<0.05);与模型组相比,隔药饼灸组和逍遥散组均有统计学意义(均P<0.05),组间比较有差异(P<0.05)。3.在海马CAl区、CA3区及杏仁核BLA区,与空白组相比,模型组和假手术组GluR1、GluR2表达均有统计学意义(均P<0.05);与模型组相比,隔药饼灸组、隔药饼灸-CNQX组和CNQX组差异均有统计学意义(均P<0.05);与CNQX组相比,隔药饼灸+CNQX组GluR2表达差异有统计学意义(P<0.05)。在海马DG区,与空白组相比,模型组和假手术组GluR2表达均有统计学意义(均P<0.05)。4.各组大鼠胃黏膜膜及结肠壁各层上皮结构完整,细胞排列整齐,黏膜下层和肌层层次清楚连续,部分模型组和假手术组粘膜肌内偶见血管扩张,偶见极少许炎细胞浸润。结论:1.运用复合病因造模法成功造成大鼠FGIDs(肝郁脾虚证)模型,隔药饼灸能明显促进胃肠吸收功能,改善内脏敏感性,提示改善胃肠的胃肠吸收和内脏敏感性可能是隔药饼灸治疗FGIDs的效应环节之一2.隔药饼灸能下调结肠5-HT、DA与中枢海马、杏仁核c-fos表达,提示脑肠轴-中枢途径可能是隔药饼灸治疗FGIDs关键所在。3.肝郁脾虚证(FGIDs)大鼠海马与杏仁核“兴奋-抑制”失衡,拮抗杏仁核区AMPA受体,抑制杏仁核兴奋,减轻海马CA1区、CA3区受损,这可能是隔药饼灸调节杏仁核、海马“兴奋-抑制”失衡的一条重要途径。
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