【摘 要】
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目的:明确MCM3基因在膀胱癌组织、癌旁正常膀胱组织及在膀胱癌细胞系中的表达情况,分析MCM3基因在正常与癌组织中的表达差异,阐明其表达水平与膀胱癌患者临床病理特征之间的
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目的:明确MCM3基因在膀胱癌组织、癌旁正常膀胱组织及在膀胱癌细胞系中的表达情况,分析MCM3基因在正常与癌组织中的表达差异,阐明其表达水平与膀胱癌患者临床病理特征之间的相关性和临床意义,同时通过体外细胞实验证实MCM3在膀胱癌细胞增殖和侵袭中发挥的作用。方法:利用膀胱癌组织和癌旁正常膀胱组织标本及膀胱癌细胞系5637和T24,通过实时定量PCR检测膀胱癌组织和癌旁正常膀胱组织MCM3 mRNA的表达水平。同时使用实时定量PCR和Western Blot检测MCM3在膀胱癌细胞系5637和T24中mRNA和蛋白质的表达水平。用脂质体转染法对膀胱癌细胞系进行MCM3特异的siRNA转染,利用CCK8,Transwell等实验对MCM3在膀胱癌细胞增殖、侵袭中的作用进行研究。结果:在临床标本中的检测MCM3的表达水平,膀胱癌组织中表达显著高于癌旁正常组织中的表达,且与膀胱癌浸润性、临床分期、复发和转移正相关。在细胞水平上,MCM3表达水平随着膀胱癌细胞恶性程度的增高而增高。特异性的siRNA转染细胞后进行RNA与蛋白质检测证实,MCM3被有效敲除。CCK8实验显示,MCM3敲除组与对照组相比,敲除组的细胞增殖情况明显受到抑制。Transwell实验结果表明,MCM3被敲除后,细胞的侵袭能力较对照组明显下降。同时通过Western blot检测MCM3敲除后对膀胱癌细胞中增殖和侵袭相关蛋白的表达情况。结论:MCM3作为DNA复制的特许因子,因此MCM3表达水平能够直接反映细胞增殖状态,这对于各种因细胞周期失调,失控后引发的不典型增生、增生性病变、肿瘤等疾病的诊断和预后,具有非常重要的意义。本实验中显示MCM3可以促进T24、5637膀胱癌细胞的增殖、促进膀胱癌细胞侵袭,这些都表明MCM3在膀胱癌细胞中扮演着促癌基因的作用,是膀胱癌的一种促癌基因。结合近几年国内外对MCM3在肿瘤进展和在肿瘤良恶性鉴别研究,基本证实MCM3在膀胱癌生物学行为中的重要作用。
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