论文部分内容阅读
三七总皂苷(Panax Notoginseng Saponins,PNS)是从中药三七的主根或根茎中提取加工制成的总皂苷,是血塞通、血栓通等中成药的主要成分。具有降低心肌耗氧量,改善心肌供血的明确临床疗效,被认为是中药三七治疗循环障碍心血管疾病的药效物质基础。但三七总皂苷在胃酸环境中易被分解,肠道黏膜的透过性低,从而导致其口服生物利用度低,影响治疗效果,限制了其口服制剂的临床应用。目前已有研究将三七总皂苷制备成普通口服小肠溶制剂,这从一定程度上可解决其稳定性问题,但小肠部位消化吸收功能较强,制剂停留时间较短,为治疗需要持续多次服药的心脑血管类慢性疾病带来不便。口服结肠定位给药系统(oral colon-specific drug delivery system,OCDDS)最初用于制备治疗结肠局部病变的药物,随着研究的不断深入,结肠被认为是一种具有开发前景的、可用于全身给药的药物吸收部位,利用结肠部位环境温和、药物滞留时间长的特点,结肠定位制剂可被运用于多种药物的研发。同时,脂质体因其特殊的磷脂双分子层结构,具有很好的生物相容性,可提高极性药物的粘膜透过能力,从而提高药物在结肠部位的吸收。目的:研究三七总皂苷脂质体口服结肠定位胶囊的处方和制备工艺,制备在结肠部位吸收好、质量稳定可控的三七总皂苷脂质体结肠定位胶囊,探索药物通过口服结肠定位给药形式进入体内的新方式。方法:(1)建立三七总皂苷的HPLC定量分析方法,同时测定其中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd、人参皂苷Re五种化学成分。采用Marvin sketch软件,对三七总皂苷中五种主要皂苷成分分子的理化性质(包括立体化学结构、固有溶解度、油水分配系数、分子内氢键供受体数量)进行综合分析;(2)采用薄膜水化法制备PNS脂质体,以包封率和载药量为考察指标,根据单因素实验结果,采用Box-Behnken响应面设计法进行处方优化,得到脂质体最佳处方并进行处方验证;对所制脂质体进行表征并对其进行初步稳定性考察;(3)采用大鼠在体单向肠灌流法,考察PNS脂质体在大鼠结肠部位的吸收情况,计算药物吸收速率常数(Ka)和表观吸收系数(Papp)并与PNS原料药的吸收情况进行比较;(4)选择PC-12细胞,建立过氧化氢氧化损伤模型,采用MTT法检测PNS脂质体对过氧化氢损伤PC-12细胞存活率的影响;(5)采用蘸胶法制备p H敏感型结肠定位胶囊壳,将所制PNS脂质体进行冷冻干燥后填入胶囊壳;模拟体内p H环境,对胶囊进行体外释放度考察,验证三七总皂苷脂质体口服结肠定位胶囊的结肠定位释放效果。结果:(1)薄膜水化法制备PNS脂质体处方及工艺优选结果为:选择蛋黄卵磷脂为脂质材料,药物占磷脂比例23.57%,胆固醇占磷脂比例13.68%,药物浓度4.64mg·m L-1,水化时间10 min,水化温度25℃。经处方验证,所制脂质体平均包封率82.9%,平均载药量14.7%,平均粒径183.0±2.25 nm,Zeta电位-12.8±0.79m V。稳定性研究结果表明所制PNS脂质体在4℃环境下放臵15 d内稳定性良好;在大鼠结肠内容物溶液中37℃孵育8 h内稳定性良好,药物累积泄露量为6.6±0.41%。(2)大鼠在体肠吸收实验结果表明,在一定范围内,PNS在结肠部位的吸收速率常数和表观吸收系数随着灌流速度的增加而增加,而与药物浓度没有明显相关性;PNS脂质体在结肠部位吸收速率常数和表观吸收系数均显著高于PNS原料药溶液。(3)体外细胞实验表明,与PNS原料药组、PNS原料药与空白脂质体物理混合组和空白脂质体组相比,PNS脂质体组对H2O2氧化损伤的PC-12细胞具有更显著的保护作用,能更显著的提高细胞存活率。(4)蘸胶法制备结肠定位胶囊壳的处方和工艺为:Eudragit S100 1.0 g,PEG 60000.4 g,丙三醇1.0 m L,丙酮10.0 m L;重复蘸胶7次,干燥后40℃固化8 h。释放度实验结果表明,药物装填胶囊后在酸中和p H 6.8缓冲液中累积释放量<标示量的10%,在p H 7.8缓冲液中1h累积释放量>标示量的70%,符合药典对肠溶制剂的要求。结论:本实验所制备三七总皂苷脂质体口服结肠定位胶囊可在结肠部位定位释放,同时以脂质体的形式包载药物可提高三七总皂苷在结肠部位的吸收速率和表观吸收系数,解决了三七总皂苷口服后在胃中易降解和吸收速率低的问题。