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当归、黄芪是中医补血、益气的常用药物,两药按1∶5配伍组成著名的当归补血汤,为中医补血生脉的基本方。红芪作为黄芪的代用品,在临床广泛应用。现代药理学研究发现当归、红芪具有一定的抗心肌缺血的作用,但由于其化学成分复杂,目前尚难以确定其药效成份。本论文应用超滤膜分离技术精制当归、红芪及其合剂水提液,应用大鼠心肌梗死模型、血流动力学监测、血管内皮细胞培养、鸡胚尿囊绒毛膜实验及分子生物学技术,对当归、红芪及其合剂50000分子量以下水提物促血管新生的作用进行了研究,主要研究内容有以下几个方面: 1.应用陶瓷膜微滤和聚丙烯腈(PNA)中空纤维超滤膜(截留分子量为5万子量)精制当归、红芪及其合剂水提物。 2.建立大鼠急性心肌梗塞实验模型。Wistar大鼠用1%戊巴比妥钠麻醉后,切开颈部皮肤暴露气管,经口气管插管,人工呼吸,经左胸第3、4肋间纯性分离开胸,结扎左冠状动脉前降支。本法手术成功率72.6%,术后72小时内大鼠死亡率仅为3.2%;本技术操作简单,创伤轻、成功率高、结果可靠。 3.为探讨当归、红芪超滤膜提取物对鸡胚尿囊绒毛膜新生血管生成的影响,制备CAM模型,观察应用当归、红芪及其合剂(1∶5)超滤膜提取物后CAM血管生成情况。结果表明当归和当归红芪合剂超滤膜提取物均有明显的促血管新生作用,而红芪未显示有促血管生成作用。提示当归超滤膜提取物具有促进CAM血管生成的作用,而当归与红芪配伍后促进CAM新生血管生成的作用更好。 4.为探讨当归、红芪及其合剂超滤膜提取物是否对人脐静脉内皮细胞(ECV-304)具有促增殖作用,并进一步研究血管内皮生长因子(VEGF)基因在此过程中的作用,以离体培养的ECV-304细胞为摸型,采用四氮唑蓝比色法(MTT法)测定细胞增值,流式细胞仪分析细胞周期,半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR))法检测VEGFmRNA表达的变化;观察了当归、红芪及其超滤膜提取物对人脐静脉内皮细胞株(ECV-304)增殖作用的影响。结果表明当归及当归红芪合剂超滤膜提取物