论文部分内容阅读
目前,家禽业出现繁殖力持续下降,每年商业品种中淘汰10%左右的弱精子症鸡。为探讨公鸡弱精子症的发生机制,本研究通过建立弱精子症人工模型并对正常公鸡和弱精子症公鸡进行精液品质测定、形态学观察；同时通过TaqMan实时荧光定量PCR (Real-Time qPCR, RT-qPCR)法,检测调控精子发生的关键基因-Piwill在不同类型生精细胞内mRNA表达水平,进一步确定该基因在家禽精子发生过程中的功能。实验结果如下：1.利用白消安构建了弱精子症人工模型,与对照组相比,处理组的精液量、精子活率和精子密度随着白消安处理时间的增加而显著降低,而精子畸形率则显著提高。白消安处理7d后,曲精细管上皮开始脱落,处理19d后生精上皮上的精子细胞层和部分精母细胞开始脱落,处理25d后曲精细管上皮只剩下精原细胞层。精液涂片结果显示,对照组和处理组精液密度差异显著(P<0.05),且处理组的精液密度随着白消安处理时间增加而降低。2.自发弱精子症中,重度弱精子症组精液量和精液密度显著低于其他组；正常组的精子畸形率显著低于弱精子症组,而精子活力则显著高于弱精子症组。正常组公鸡精液密度和中度弱精及重度弱精子症组差异显著。3.按照精子发生过程,分别在4.5日龄和18日龄的鸡胚中分离到PGCs和SSCs细胞,且其PAS鉴定结果和SSEA-1结果均显示阳性。经流式细胞仪分选睾丸组织细胞,分别得到单倍体、二倍体和四倍体细胞。采用“上游法”得到纯化的精子细胞。在精子发生过程中,Piwil1在生殖干细胞内低表达,在精原细胞中高表达,在成熟精子几乎不表达。推测Piwil1的转录产物参与了精子发生过程的调控。在弱精子症中,正常组Piwil1的绝对拷贝数显著高于人工模型和自发弱精子症组(P<0.05)；人工模型组Piwil1的绝对拷贝数随着时间延长而减少,且在白消安处理7d后,Piwill转录产物表达水平迅速降低,在处理13d后达到并维持在较低的表达水平。综上,本研究表明利用白消安可以构建鸡人工模型弱精子症,睾丸曲精细管上皮完整性和其精子发生呈正相关,曲精细管上皮越完整,精液品质越高；在精子发生过程中,Piwill在生殖干细胞内低表达,在减数分裂时期Piwill高表达,完成减数分裂后不表达；Piwill参与了精子发生过程,弱精子症鸡中Piwill显著降低甚至不表达,表明Piwill可能与弱精子症的发生相关。