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河南大尾寒羊是优良的地方品种,本试验就河南大尾寒羊的细管冻精、超数排卵和胚胎冷冻、皮肤成纤维细胞的体外培养等进行了研究,以实现河南大尾寒羊品种资源的保护和为建立基因库提供技术支持。1河南大尾寒羊细管冻精试验采集河南大尾寒羊种公羊的精液,采用不同的配方、不同的甘油和卵黄浓度进行细管冻精试验。结果表明:采用8.25 g乳糖和2.5 g葡萄糖组合冷冻大尾寒羊精液效果优于其他两种配方,解冻后活力为0.38±0.24,畸形率为13.43%±0.36;稀释液中添加甘油和卵黄的适宜浓度分别为6%和20%。2河南大尾寒羊超数排卵和胚胎冷冻试验对河南大尾寒羊进行超数排卵和胚胎冷冻试验,探讨不同激素、季节、输精方式以及重复超数排卵对其超数排卵效果的影响以及程序化冷冻之后胚胎的发育率。结果表明:采用加拿大产FSH,河南大尾寒羊获得的只均黄体数(15.76±4.53)和只均获胚数(12.76±5.18)显著高于采用新西兰产FSH组(11.78±3.62,8.78±2.67);冬季处理的河南大尾寒羊获得的只均黄体数(18.11±4.00)、只均胚胎数(14.84±3.30)和只均可用胚数(5.21±1.72)显著高于春季(13.44±2.95,9.44±2.09,3.78±1.93)和秋季处理组(11.61±3.05,9.56±2.57,2.72±2.08); FSH采用350mg剂量,河南大尾寒羊只均黄体数(18.27±9.46)和只均胚胎数(14.53±11.00)显著高于300mg剂量组(12.23±4.81, 10.23±4.90),且优于400mg剂量组;腹腔内子宫角输精,河南大尾寒羊只均可用胚数(4.68±2.61)显著高于阴道输精(1.89±4.14);重复超数排卵各次之间的只均黄体数、只均胚胎数和只均可用胚数差异不显著;胚胎冷冻后抽检胚胎的形态完整率为100%,冻后发育率为75%。3河南大尾寒羊皮肤成纤维细胞的分离培养采用组织块法对河南大尾寒羊皮肤成纤维细胞进行了原代和继代培养。结果表明:利用组织块法能够成功培养河南大尾寒羊皮肤成纤维细胞;河南大尾寒羊皮肤细胞原代生长是上皮细胞和成纤维细胞的混合物,通过传代可以得到纯化的成纤维细胞;河南大尾寒羊皮肤成纤维细胞经过潜伏期、对数生长期和平台期的时间分别为0~5d,5~8d,8~10d。传至第8代的河南大尾寒羊皮肤成纤维细胞可保持正常染色体核型。