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目的探讨叶酸代谢主要基因MTHFR C677T、A1298C和MTRR A66G三个位点基因多态性在多囊卵巢综合征中的临床意义。方法收集2018年4月-2018年8月在广东省妇幼保健院就诊的多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome PCOS)患者共55例作为PCOS组;选取46例月经规则、有排卵,并完成一次生育的非PCOS患者作为对照组。在PCOS组中,按HOMA稳态模型(HOMA-IR)分为两亚组:PCOS胰岛素抵抗(PCOS insulin resistance PCOS-IR)组和PCOS非胰岛素抵抗(PCOS without insulin resistance PCOS-NIR)组;按多毛评分标准(mF-G score)和血清游离雄激素指数(Free androgen index FAI)分为两亚组:高雄激素症组和非高雄激素症组;按腰臀比(Waist-to-Hip Ratio WHR)分为两亚组:向心性肥胖组和非向心性肥胖组。我们同时根据MTHFR C677T位点、A1298C位点、MTRR A66G位点不同基因型分别分三个亚组:CC基因组、CT基因组、TT基因组;AA基因组、AC基因组、CC基因组;AA基因组、AG基因组、GG基因组。PCOS组和对照组患者分别抽提取血浆,利用荧光定量PCR方法检测MTHFR基因C677T、A1298C及MTRR基因A66G的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms SNPs),同时采用化学发光法检测两组血浆维生素B12、叶酸及同型半胱氨酸(homocysteine HCY)的含量。采用SPSS软件分析PCOS组与对照组间血浆HCY、叶酸、维生素B12水平的差异性,比较两组间基因型频率、等位基因频率的分布差异,并结合患者肥胖及内分泌、代谢等临床资料进行分析,进一步阐明MTHFR基因两位点多态性与MTRR基因多态性的关系。结果1.PCOS组中HCY水平(9.740±1.98μmol/L)较对照组(8.73±2.07μmol/L)明显升高,差异有统计学意义(t=2.50,P<0.05),而PCOS组中血清维生素B12、叶酸水平与对照组相比,差异无统计学意义(t=-0.064,t=-0.105,均P>0.05)。Pearson相关分析发现PCOS组中HCY水平与雄烯二酮呈正相关(r=0.304,P=0.027)。2.PCOS组MTHFR基因C677T位点CC、CT、TT基因亚组间HCY、叶酸、维生素B12水平差异无统计学意义(均P>0.05)。对照组中TT基因组的HCY水平高于CC和CT基因组,组间比较差异有统计学意义(t=3.481,t=3.630,均P<0.05),TT基因组血浆叶酸水平低于CC基因组,组间比较差异有统计学意义(t=2.169,P<0.05),血清维生素B12水平组间差异无统计学意义(F=0.650,P>0.05)。PCOS组、对照组MTHFR基因A1298C位点AA、AC和CC基因亚组间及MTRR基因A66G位点AA、AG和GG基因亚组间HCY、叶酸、维生素B12水平差异无统计学意义(均P>0.05)。3.MTHFR基因C677T位点野生基因型CC、杂合基因型CT、纯合突变基因型TT在PCOS组中分别占58.2%、36.4%、5.55%,野生基因C、突变基因T分别占76.4%和23.6%;在对照组中分别占36.2%、47.8%、15.2%,C、T等位基因频率分别为60.9%和39.1%;MTHFR基因C677T位点CC基因型在PCOS组的分布频率(58.2%)较对照组(36.2%)明显升高,差异具有统计学意义(X2=5.474,P<0.05),CC基因型携带者与TT基因型携带者相比,患PCOS的风险提高了4.392倍(95%CI:1.005-19.196)。等位基因C在PCOS组的分布频率(76.4%)较对照组(60.9%)明显升高,差异具有统计学意义(X2=5.626,P<0.05),等位基因C使PCOS的风险增加2.077倍(95%CI:1.132-3.812)。MTHFR基因A1298C位点AA、AC、CC基因型频率在PCOS组中分别占47.3%、43.6%、9.1%,A、C等位基因频率分别为69.1%和30.9%;在对照组中分别占41.1%、51.8%、7.1%,A、C等位基因频率分别为70.7%和29.3%;两组在MTHFR基因A1298C位点各基因型和等位基因频率的分布差异无统计学意义(均P>0.05)。MTRR基因A66G位点AA、AG、GG基因型频率在PCOS组中分别占41.8%、52.7%、5.5%,A、G等位基因频率分别为68.2%和31.8%;在对照组中分别占54.3%、39.1%、6.5%,A、G等位基因频率分别为73.9%和26.1%;两组在MTRR基因A66G位点各基因型和等位基因频率的分布差异无统计学意义(均P>0.05)。4.PCOS-IR组和PCOS-NIR组、高雄激素症组和非高雄激素症组、向心性肥胖组和非向心性肥胖组在MTHFR基因C677T、A1298C位点及MTRR基因A66G位点各基因型分布频率差异无统计学意义(均P>0.05)。5.PCOS组中MTHFR基因C677T位点TT基因亚组高密度脂蛋白、低密度脂蛋白水平高于CC基因亚组,差异有统计学意义(均P<0.05);CC、CT、TT基因亚组间BMI、雄烯二酮、FAI、LH/FSH、空腹胰岛素、HOMA-IR、甘油三酯、总胆固醇水平差异均无统计学意义(均P>0.05)。PCOS组中MTHFR基因A1298C位点CC基因亚组甘油三酯水平高于AA及AC基因组,差异有统计学意义(均P<0.05);AC基因组与AA基因组比较,低密度脂蛋白水平差异有统计学意义(均P<0.05);AA、AC、CC基因亚组间BMI、雄烯二酮、FAI、LH/FSH、空腹胰岛素、HOMA-IR、甘油三酯、总胆固醇水平差异均无统计学意义(均P>0.05)。PCOS组中MTRR基因A66G位点AA、AG、GG基因亚组间BMI、雄烯二酮、FAI、LH/FSH、空腹胰岛素、HOMA-IR、甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白水平差异均无统计学意义(均P>0.05)。6.PCOS组和对照组均存在C667C-A1298A-A66A、C667C-A1298A-G66G、T667T-A1298A-A66A、C667C-C1298C-A66A四种纯合子单体型;而C667C-C1298C-G66G纯合子单体型只在PCOS组存在,对照组中不存在;PCOS组与对照组均不存在T677T-C1298C纯合突变子。可见MTHFR基因C677T与A1298C两位点基因多态性之间存在相互影响关系,MTHFR基因A1298C与MTRR基因A66G位点基因多态性之间不存在相互影响关系。经Logistic回归分析,MTHFR基因C677T、A1298C位点及MTRR基因A66G位点基因多态性之间不存在交互作用,表明同时携带MTHFR基因C677T、A1298C位点和MTRR基因A66G位点突变等位基因对PCOS发生的风险无协同增加作用。结论1.PCOS患者中存在高HCY血症。2.MTHFR基因C677T位点基因多态性可导致血液HCY升高,叶酸降低,而MTHFR基因A1298C位点、MTRR基因A66G位点基因多态性不影响血浆叶酸、HCY水平。3.MTHFR基因C677T位点CC基因型可增加PCOS的发生风险,等位基因C是PCOS的遗传易感基因。4.MTHFR基因C677T与A1298C两位点基因多态性之间存在相互影响关系,MTHFR基因A1298C与MTRR基因A66G位点基因多态性之间不存在相互影响关系。MTHFR基因C677T、A1298C位点及MTRR基因A66G位点基因多态性之间不存在交互作用,表明同时携带MTHFR基因C677T、A1298C位点和MTRR基因A66G位点突变等位基因对PCOS发生的风险无协同增加作用。