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研究目的:探讨microRNA-199a-3p(miR-199a-3p)通过调控PI3K/Akt/m TOR信号通路参与Human Embryonic Lung Fibroblasts(HELF)细胞表型转化。研究方法:1.实验分Control组和TGF-β1组,TGF-β1组单独使用TGF-β1诱导HELF细胞表型转化模型,Control组给予等量含10%FBS(fetal bovine serum)的DMEM培养基。Western Blot检测α-SMA蛋白在两组细胞中表达的变化。2.对HELF细胞表型转染mi R-199a-3p inhibitors NC及miR-199a-3p inhibitors。实验分6组:空白对照(control)组、TGF-β1组、miR-199a-3p inhibitors NC组、miR-199a-3p inhibitors NC+TGF-β1组、miR-199a-3p inhibitors组、miR-199a-3p inhibitors+TGF-β1组。3.qRT-PCR技术检测以上6组细胞中miR-199a-3p的表达。4.Western Blot检测以上6组细胞α-SMA、Collagen I、PI3K、Akt、P-Akt(S473)、P-Akt(T308)、mTOR、P-mTOR(S2448)蛋白的表达水平。研究结果:1.Western Blot检测经TGF-β1处理后HELF细胞的α-SMA蛋白表达对比control组明显增加,证明体外模型成功建立。2.qRT-PCR检测6组HELF细胞的miR-199a-3p的表达,发现TGF-β1诱导的HEF细胞中miR-199a-3p表达与正常对照组相比明显升高,miR-199a-3p inhibitors NC+TGF-β1组、TGF-β1组miR-199a-3p表达对比无显著变化。mi R-199a-3p inhibitors NC组的HELF细胞miR-199a-3p表达较miR-199a-3p inhibitors组明显上升,miR-199a-3p inhibitors+TGF-β1组miR-199a-3p表达较miR-199a-3p inhibitors NC+TGF-β1组明显减低,表明miR-199a-3p inhibitors能逆转TGF-β1诱导的HELF细胞中miR-199a-3p表达升高。3.Western Blot检测6组HELF细胞的α-SMA、Collagen I蛋白水平,经TGF-β1处理后HELF细胞的α-SMA、Collagen I蛋白表达与正常对照组相比明显增加。在TGF-β1组与miR-199a-3p inhibitors NC+TGF-β1组中HELF细胞的α-SMA、Collagen I蛋白表达无明显变化。miR-199a-3p inhibitors+TGF-β1组的HELF细胞α-SMA、Collagen I蛋白表达较miR-199a-3p inhibitors NC+TGF-β1组明显减低。表明:miR-199a-3p在HELF细胞表型转化中起着重要作用。4.Western Blot检测6组HELF细胞蛋白,TGF-β1组磷酸化蛋白P-Akt(S473)、P-Akt(T308)、P-m TOR(S2448)蛋白表达与正常对照组相比显著增加,而总蛋白PI3K、Akt、mTOR的表达无变化,表明TGF-β1可诱导HELF细胞表型转化中的PI3K/Akt/m TOR信号通路激活。在TGF-β1组与miR-199a-3p inhibitors NC+TGF-β1组中HELF细胞的磷酸化蛋白P-Akt(S473)、P-Akt(T308)、P-m TOR(S2448)蛋白表达无明显变化。mi R-199a-3p inhibitors+TGF-β1组的HELF细胞磷酸化蛋白P-Akt(S473)、P-Akt(T308)、P-m TOR(S2448)蛋白表达较mi R-199a-3p inhibitors NC+TGF-β1组明显减低,而总蛋白PI3K、Akt、mTOR的表达无变化。表明转染miR-199a-3p inhibitors可抑制TGF-β1的PI3K/Akt/mTOR信号通路激活作用。研究结论:1.TGF-β1诱导转化HELF细胞表型转化模型中miR-199a-3p表达升高。2.miR-199a-3p inhibitors能抑制TGF-β1诱导的HELF细胞表型转化。3.miR-199a-3p可以通过调节PI3K/Akt/mTOR信号通路参与HELF细胞表型转化。