赤雹为葫芦科赤雹属植物赤雹(Thladiantha dubia Bunge)的干燥果实,主要分布于东北华北地区,具有理气、活血、降逆、理湿等功效。在我省承德地区民间用赤雹果实的水煎液治疗腰腿疼痛和腰部扭伤,疗效显著。佟继铭报道赤雹水提液具有很强的镇痛、抗炎和抗过敏作用,并且水提物部分活性最强。但是有关赤雹果化学成分的报道较少,Nagao T等从赤雹的根中分离得到了6个三萜皂苷类化合物赤雹苷A、B、C、D、E、F。李兰芳等采用气相色谱-质谱联用仪(GC-MS)对赤雹果实中挥发油进行了分析研究。本文采用现代色谱技术对其化学成分进行提取、分离纯化及结构鉴定,并对其多糖成分进行了含量测定,为寻找赤雹镇痛抗炎活性成分并将其开发成新的镇痛抗炎药物提供理论依据。目的:对赤雹果实的化学成分进行系统研究,采用系统溶剂萃取法和硅胶、聚酰胺及葡萄糖凝胶柱色谱等分离方法对其化学成分进行系统分离得到单体化合物,运用UV、IR、1H-NMR、13C-NMR、MS等现代化的波谱鉴定技术分析确定结构式,为寻找其镇痛抗炎活性成分提供基础性研究。采用苯酚-硫酸比色法对赤雹的多糖成分进行含量测定。方法:1、赤雹化学成分的系统预试验:取干燥赤雹果实4份,每份10 g,分别制成酸性乙醇提取液、水提取液、甲醇提取液以及石油醚提取液。按照化学成分系统预实验的方法对赤雹果中所含各类化学成分进行检识。2、赤雹化学成分的提取、分离及结构鉴定:取干燥赤雹2 kg用95%乙醇回流三次,合并滤液浓缩得1220.7 g浸膏,依次用石油醚、乙醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取,分别得各部分萃取物。其中石油醚萃取物蒸干加甲醇溶解,甲醇溶解部分经硅胶柱色谱分离, Fr [10-18]结晶得白色颗粒状结晶Ⅳ,Fr [37 -40]得白色颗粒状结晶Ⅰ,Fr [51-59]得白色针状结晶Ⅱ,Fr [120-123]再次经硅胶柱色谱分离得白色颗粒状结晶Ⅲ。甲醇不溶部分经硅胶柱色谱分离,Fr 3再次经硅胶柱色谱分离得白色针状结晶Ⅴ,Fr [21-23]再次经硅胶柱色谱分离得白色固体Ⅵ,经GC-MS检测为多个长链脂肪烃的混合物。Fr 369结晶得白色片状结晶Ⅶ。乙醚部分经丙酮萃取后,丙酮不溶物经硅胶柱色谱分离得白色针晶,经测定,与化合物Ⅲ为同一种物质。乳化层部分经硅胶柱色谱和Sepherdex LH-20柱色谱分离纯化得到白色颗粒状结晶Ⅷ。正丁醇部分经硅胶柱色谱和Sepherdex HL-20柱色谱分离纯化得到白色针状结晶Ⅸ。3、赤雹多糖的含量测定:采用苯酚-硫酸法通过观察多糖的紫外吸收测定多糖的含量:(1)多糖提取与精制:采用加热回流法提取多糖,经去脂、去蛋白等步骤纯化,干燥后得精制多糖。(2)苯酚试液的制备:将苯酚蒸馏后,加水溶解,备用。(3)供试品溶液的制备:供试品采用超声水液提取法,定容后备用。(4)标准曲线的制备:配置合适浓度的葡萄糖溶液,选择合适的波长,测定吸收度。(5)重现性实验:精密称取5份药材制备供试品溶液,测定吸收度,考察分析方法重现性。(6)加样回收率实验:称取已知含量的样品,准确加入一定量的对照品溶液,计算加样回收率。(7)精密度实验:精密称取5份药材制备供试品溶液,测定吸收度,考察分析方法精密度。(8)稳定性实验:测定多糖溶液、标准品溶液、样品溶液在一个小时之内的吸光度以测定稳定性。结果:1、赤雹化学成分经经系统预试验结果表明其果实中含有生物碱、甾醇、香豆素、有机酸、鞣质、糖及苷类、蛋白质、氨基酸、油脂等类成分。2、赤雹的化学成分研究:通过溶剂提取法和色谱法从赤雹果中提取分离得到8个单体化合物,1个同系脂肪烃类化合物,另2个化合物结构待定。其中6个单体化合物经波谱测定确定了结构,它们分别为棕榈酸(Ⅰ)、α-菠甾醇(Ⅱ)、α-菠甾醇-3-O-β-D-葡萄糖苷(Ⅲ)、三十烷醇(Ⅳ)、α-菠甾醇-3-O-β-D-葡萄糖苷-6′-棕榈酸酯(Ⅶ)、甘露醇(Ⅸ)。同系脂肪烃类化合物为:二十四烷烃、二十五烷烃……至三十烷烃(Ⅵ)。3、赤雹多糖的含量测定:测定波长选在488 nm,苯酚-硫酸显色,回归线性方程为A = 12.862C+0.0069,线性关系良好(r = 0.9992),赤雹果实中多糖含量为3.43 %,重现性RSD = 3.44 %,加样回收率RSD=1.81%,样品溶液稳定性RSD = 1.86 %。结论:化学成分研究中提取溶剂、提取方法选择适当,采用硅胶、聚酰胺、葡聚糖凝胶等柱色谱法对赤雹的化学成分实现了较好的分离及纯化。分离并确定了6个化合物的结构,除棕榈酸以外5个为首次从赤雹属植物中发现,α-菠甾醇-3-O-β-D-葡萄糖苷-6’-棕榈酸酯是在葫芦科中首次分离得到,为进一步研究其镇痛抗炎活性提供了物质基础。以葡萄糖为对照品用苯酚-硫酸法对赤雹多糖进行含量测定,方法简单可靠,专属性强,重现性好,确定了赤雹果实中多糖的含量。