塞内卡病毒全基因序列分析及反向遗传系统的建立

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塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)是一种可引起猪口腔和蹄冠部水疱的病原体。本研究对分离自郑州市的SVA/CH/ZZ/2016分离株进行序列测定,并进行全基因组分析。应用RT-PCR对SVA/CH/ZZ/2016株全基因组进行分段扩增,并在病毒基因组2176位引入Nde I酶切位点,成功构建感染性c DNA克隆。转染BHK-21细胞,在PK-15细胞上盲传至出现细胞病变(CPE)。取CPE细胞上清进行RT-PCR扩增、测序、间接免疫荧光试验、蛋白免疫印迹试验进行鉴定。将拯救病毒与亲本病毒进行空斑试验及病毒一步法生长曲线的比较。将拯救病毒免疫动物制备多克隆阳性血清,与亲本病毒进行交叉中和试验。结果表明,SVA/CH/ZZ/2016分离株序列全长7292bp。选择国内外9株参考毒株序列对编码区12个基因的核苷酸进行分段比对,表明核苷酸同源性最高的为3B基因,同源性最低的为VP1基因。VP1基因遗传进化分析表明SVA/CH/ZZ/2016株与2016年美国分离株亲缘关系最近。成功构建含SVA全长c DNA克隆的重组质粒;重组质粒转染后经PK-15细胞盲传F5代出现SVA典型CPE;CPE细胞上清间接免疫荧光试验、蛋白免疫印迹试验结果表明,成功拯救SVA病毒;病毒空斑试验及生长曲线结果表明,拯救毒株与亲本毒株的复制能力及增殖特性相似;交叉中和试验结果表明,两毒株间抗原相关性“r值”=0.98,两毒株抗原相似性很高。
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