研究背景：食管癌是一种常见的消化系统恶性肿瘤,具有发病率高、死亡率高和地域倾向性的特点,对人类的健康已经构成严重的威胁。在全世界范围内,食管癌是癌症导致死亡的第6大因素,我国是食管癌高发的国家,每年因食管癌死亡的人数高达16万,其病死率位居恶性肿瘤的第四位。食管癌与其他消化道肿瘤一样,呈高侵袭性生长,且容易发生转移扩散,而肿瘤转移和复发是食管癌预后差的主要原因之一,目前根治性食管癌切除后5年复发率仍高达40%以上。虽然对于食管癌的发病机制已经有了较为广泛的研究,但其具体的机制至今未明确,仍有待进一步探讨。目前研究表明,食管癌的发生与发展是多基因参与、多阶段和多途径协同作用而形成。因此,有必要从筛选关键靶基因和靶蛋白的角度对食管癌转移的机制进行深入研究,为诊断和治疗食管癌提供新靶点和策略。RNA结合蛋白参与RNA的剪接、转运、定位、代谢等步骤,其结构与功能的异常往往可导致疾病的发生。在已知的RNA结合蛋白中,研究最多的是STAR蛋白家族,即信号转导与RNA活化蛋白,这是一类集信号转导特性与RNA激活功能于一身的蛋白质。Sam68是STAR蛋白家族的代表成员之一,分子量约为68kDa,在有丝分裂过程中是酪氨酸蛋白激酶Src的底物。Sam68含有可与RNA结合的KH结构域,其富含脯氨酸的序列,可以与含SH3结构域的蛋白相互作用；羧基末端富含酪氨酸残基,被Src蛋白酪氨酸激酶磷酸化后,可与SH2结构域的蛋白相互作用。Sam68能与多种信号传导蛋白结合,包括Grb2、Nck、 rasGAP、蛋白酪氨酸激酶Src和ItK。它可作为酪氨酸蛋白激酶Src的底物参与有丝分裂过程,酪氨酸磷酸化是信号转导途径中最常见的一种调节方式,因此Sam68也被认为参与信号转导过程。Sam68还能通过与各种蛋白及RNA靶序列相互结合,以调控mRNA的表达,它可改变mRNA的稳定性、RNA结合活性、RNA输出和RNA翻译,快速调控蛋白表达水平,进而影响细胞的增殖、分化和生长过程。研究表明,Sam68与肿瘤细胞增殖及进展密切相关。国内外一些研究报道了Sam68在恶性肿瘤患者中高表达,其中包括前列腺癌、肾癌、乳腺癌、宫颈癌、结肠癌、非小细胞肺癌,并且发现其高表达与多项不良病理学指标相关,可作为肿瘤患者的有效预后因素。因此,Sam68的表达异常是肿瘤发生发展过程中的一个重要因素,已成为肿瘤发病机制研究领域的新热点。目前,关于Sam68与食管癌的研究国内外鲜有报道,Sam68能否作为预测食管癌不良预后的生物学指标,尚未见报道。Ki67是一种非组蛋白性核蛋白,由第10号染色体长臂上的所属基因转录、翻译而成的两条多肽链,也是细胞有丝分裂过程中相关的增殖细胞核抗原,参与调控细胞周期,存在于细胞有丝分裂的G1、S、G2、M期,其在G1后期开始出现,在S期和G2期逐渐升高,M期达到高峰,但G0期无表达。Ki67在S期聚集,尤其在后半期表达率明显增高,故Ki67只在增殖期细胞中表达,而不表达于静止期细胞。因此,Ki67可用于识别生长中的正常细胞和肿瘤细胞,是反映细胞群体增殖活性的可靠指标,也是目前较为肯定的增殖细胞标记基因。Ki67在细胞中的高表达可以使细胞具有旺盛的增殖能力,促使肿瘤的发生。许多研究表明Ki67表达率能够反映人类多种肿瘤的潜在增殖活性以及肿瘤的生物学行为。肿瘤的恶性程度越高,细胞的异型性越大,生物学行为越活跃,Ki67的表达率越高；而其表达率越高,肿瘤细胞的增殖活性越大,肿瘤复发的可能性越早、越大,越容易发生侵袭和转移,所以肿瘤的发生发展、转移、复发及预后与Ki67的表达强度相关。总之,Ki67表达率的高低可用来评估肿瘤细胞的增殖活性、探究肿瘤生物学行为、推断对机体的危害性、指导患者的治疗及评测预后,具有重要的临床价值。目的：研究Sam68和ki67蛋白在食管癌组织中的表达和分布情况,分别分析两者与食管癌患者年龄、性别、肿瘤的大小、肿瘤生长的部位、肿瘤浸润深度、淋巴结转移、病理分级、TNM分期之间的关系,并进一步分析两者间的相关性,探讨两者是否可作为食管癌的特异性生物标记物及其联合检测的临床意义。方法：随机抽取肇庆市第一人民医院2010年6月至2013年6月行食管鳞状细胞癌根治术的患者的癌组织及对应的癌旁组织,共127例,男性100例,女性27例,年龄40-75岁,中位年龄61岁,有完整的临床、病理资料,且术前未行放疗、化疗或其他针对肿瘤的生物治疗,按照2010年AJCC食管癌分期标准进行分期。以上样本经手术切除后迅速放入液氮中保存,并已经病理学检测证实。用免疫组织化学的方法检测患者癌组织及其对应癌旁组织中Sam68和ki67蛋白的表达和分布情况,分别分析两者与年龄、性别、肿瘤发生部位、肿瘤分期、分级、肿瘤大小、浸润深度和淋巴结转移的关系及两者间的相关性。分析Sam68和ki67蛋白与患者无病生存率、总生存率的关系,研究其对患者预后的影响。结果：1.Sam68蛋白的分布：免疫组化方法检测Sam68蛋白在食管癌组织和癌旁组织及正常食管组织中的表达分布,结果表明,Sam68蛋白主要定位于食管癌细胞、癌旁组织增生的鳞状上皮细胞及食管正常鳞状上皮细胞的细胞核中。2.Ki67蛋白的分布：免疫组化方法检测Ki67蛋白在食管癌组织和癌旁组织及正常食管组织中的表达分布,结果表明,Ki67蛋白主要定位于食管癌细胞、癌旁组织增生的鳞状上皮细胞及食管正常鳞状上皮细胞的细胞核中。3.Sam68蛋白在食管癌与癌旁组织中的表达情况：实验结果显示,Sam68蛋白在127例食管癌中高表达,其阳性表达率为63.8%(81/127),其在对应癌旁组织的的表达相对较弱,阳性表达率为32.3%(41/127)。Sam68蛋白在食管癌及其对应癌旁组织的表达存在显著性差异(P<0.05)。4.ki67蛋白在食管癌与癌旁组织中的表达情况：Ki67染色阳性细胞数以25%作为分界点,染色阳性细胞数小于25%为低表达,大于25%的为高表达。实验结果显示,ki67蛋白在127例食管癌中高表达率为45.7%(58/127),低表达率为54.3%(69/127),而其癌旁组织均为低表达或阴性表达,无高表达。5.Sam68蛋白与临床病理因素的关系实验分析结果表明,Sam68蛋白与肿瘤分期、分级、肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移相关(P<0.05),与年龄、性别、肿瘤发生部位无关(P>0.05)。6.Ki67蛋白与临床病理因素的关系实验分析结果表明,Ki67蛋白与肿瘤分期、分级、肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移相关(P<0.05),与年龄、性别、肿瘤发生部位无关(P>0.05)。7.Sam68蛋白与ki67蛋白之间的关系对127例食管癌患者Sam68蛋白和ki67蛋白表达情况进行Spearman相关性分析检验,结果发现Sam68与ki67成正相关(相关系数r=0.592,P<0.001),即随着Sam68蛋白表达水平升高,其相应的ki67蛋白的表达水平也随之升高。8.Sam68蛋白和ki67蛋白与食管癌预后相关性分析实验分析结果显示,Sam68蛋白和ki67蛋白与食管癌患者无病生存率、总生存率相关。Kaplan-meier单因素生存分析显示,Sam68与Ki67蛋白高表达组患者DFS、OS率小于其低表达组(P<0.05)。结论：1.Sam68蛋白在食管鳞状细胞癌组织中相对于癌旁组织呈现高表达,且与肿瘤的分化程度、浸润深度、临床分期、淋巴结转移有明显关系,而与患者的年龄、性别、肿瘤发生部位、肿瘤大小无明显关系,提示Sam68蛋白参与了食管癌的发生和发展过程,并与食管癌的浸润转移相关,可能成为判断恶性程度及预后的潜在分子生物学指标。2.Ki67蛋白在食管鳞状细胞癌组织表达明显高于其相对应的癌旁组织,且与肿瘤的分化程度、浸润深度、临床分期和淋巴结转移有明显关系,与患者的年龄、性别、肿瘤发生部位和肿瘤大小无明显关系。提示Ki67蛋白可能参与了食管癌的发生、发展,其表达高低与食管癌的病理分级相关,与食管癌的增殖和转移密切相关,可作为判断预后的参考指标之一3.Sam68蛋白与Ki67蛋白在食管鳞状细胞癌组织中的表达一致,呈现明显的正相关性(r=0.592,P<0.001)。两者在促进食管鳞状细胞癌的增殖、侵袭和转移可能具有协同作用。4.联合检测Sam68蛋白与Ki67蛋白在食管鳞状细胞癌的表达,可以为评估食管癌的恶性生物学行为,以及为临床选择治疗方式提供有用的理论依据。Sam68蛋白与Ki67蛋白有望在未来成为治疗食管癌的新靶点。