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目的食管癌变是一个多因素影响、多阶段进行的演进过程。随着分子生物学技术的快速发展和应用,使得人们能够在分子水平深入了解肿瘤的发病机制。大量的研究证据显示,细胞信号转导通路将为食管癌的诊断和治疗提供新的靶点。针对食管癌发生发展过程中特定靶点或几个靶点联合的干预将为食管癌的治疗提供新的思路。异泽兰黄素来源于艾属植物种,它是一种有效的黄酮成分,分子结构为5,7-二羟基-3,4,6-三甲基黄酮。已有研究表明,异泽兰黄素具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤活性和细胞保护活性,但是异泽兰黄素发挥生物活性的机制及其对食管癌的作用尚不清楚。本研究拟通过体外培养细胞增殖、细胞软琼脂克隆形成、流式细胞技术和蛋白印迹等实验技术,探讨异泽兰黄素通过何种机制抑制TE1的增殖,以期为食管癌变早期化学干预提供实验依据。材料与方法1.通过细胞毒性实验检测不同浓度(0、3.125、6.25、12.5、25、50μM)的异泽兰黄素对食管癌细胞TE1是否有毒性效应。2.通过细胞增殖实验得出不同浓度(0、2.5、5、10、20、40μM)的异泽兰黄素在不同时间(0、24、48、72、96h)对食管癌细胞TE1的抑制作用。3.通过细胞软琼脂克隆形成实验观察不同浓度(0、2.5、5、10、20、40μM)异泽兰黄素对食管癌细胞TE1的克隆形成能力的影响。4.食管癌细胞TE1经过不同浓度的异泽兰黄素处理24h后,用流式细胞技术检测异泽兰黄素对食管癌细胞TE1细胞周期的影响。5.通过蛋白质印迹法来检测异泽兰黄素作用于食管癌细胞TE1细胞的AKT-GSK3β和MAPK/ERK信号通路变化。结果1.异泽兰黄素对食管癌细胞TE1的毒性作用通过不同浓度的异泽兰黄素作用于食管癌细胞TE124、48h,测出细胞存活率OD值曲线,异泽兰黄素作用于食管癌细胞ICso处的浓度约为40μM,依次往下形成浓度梯度：0、2.5、5、10、20、40μM做下一步的实验。2.异泽兰黄素可以抑制食管癌细胞TE1细胞的增殖与对照组相比,异泽兰黄素抑制食管癌细胞TE1的增殖(P<0.05),并呈时间和剂量依赖性。3.异泽兰黄素抑制TE1细胞软琼脂克隆形成与对照组相比,不同浓度的异泽兰黄素均能减少TE1细胞的克隆数(P<0.05),并且随着异泽兰黄素作用浓度的增高,TE1细胞克隆数呈下降趋势(P<0.05)。4.异泽兰黄素通过阻滞细胞周期G1期来抑制TE1的增殖结果显示,与对照组相比,随着异泽兰黄素作用于食管癌细胞TE1浓度的增高,G1期比例也呈现增高趋势(P<0.05)。5.异泽兰黄素抑制AKT-GSK3β和MAPK/ERK信号通路异泽兰黄素可以降低信号通路AKT-GSK3β中AKT及其下游GSK3β的磷酸化水平,随着异泽兰黄素浓度的增高,AKT及其下游GSK3β的磷酸化下平依次呈下降趋势(P<0.05)；异泽兰黄素也可以抑制MAPK/ERK信号通路,降低该通路中磷酸化ERK水平(P<0.05)。结论1.异泽兰黄素通过阻滞细胞周期G1期抑制食管癌细胞TE1的增殖,并且可以减少TE1细胞的软琼脂克隆形成。2.异泽兰黄素抑制TE1细胞信号通路AKT及其下游分子GSK3β的磷酸化,也可以抑制MAPK/ERK信号通路中磷酸化ERK水平。